細(xì)胞轉(zhuǎn)染界說(shuō)：將外源分子如DNA RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技能。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞可存在多個(gè)拷貝數(shù)，發(fā)生高水平的表達(dá)，但一般只繼續(xù)幾天，多用于發(fā)起子和其他調(diào)控元件的剖析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染功率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)剖析成果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)協(xié)助檢測(cè)。
安穩(wěn)轉(zhuǎn)染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也或許作為一種游離體存在。雖然線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，一般需求一些選擇性標(biāo)記重復(fù)挑選得到安穩(wěn)轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。
方法及特征:
化學(xué)法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法
物理法：電穿孔法、顯微注射法、biolistic顆粒傳遞法
病毒介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒
陽(yáng)離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)構(gòu)成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。
特征：簡(jiǎn)單通用，適用性廣，轉(zhuǎn)染功率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清，轉(zhuǎn)染功率隨細(xì)胞類型改變大。
脂質(zhì)體法因?yàn)橹|(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的觸摸機(jī)會(huì)遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染功率要高。懸浮細(xì)胞建議運(yùn)用電穿孔法。
電穿孔法：運(yùn)用高壓電脈沖對(duì)細(xì)胞膜的攪擾，使其構(gòu)成利于核酸進(jìn)入的微孔。
特征：需求特定儀器，適用性廣，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組，細(xì)胞致死率高。
逆轉(zhuǎn)錄病毒（RNA）：通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互效果進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)錄酶發(fā)起組成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中。
特征：安穩(wěn)轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等，但帶著基因不能太大。
腺病毒（雙鏈DNA）：先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合，繼而在αV整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞。
特征：可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
影響轉(zhuǎn)染的要素：
1、血清 血清影響復(fù)合物的構(gòu)成，降低轉(zhuǎn)染功率
陽(yáng)離子脂質(zhì)體和DNA的*量在運(yùn)用血清時(shí)會(huì)有所不同，因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中參加血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康，關(guān)于對(duì)血清短少比較活絡(luò)的細(xì)胞，可以運(yùn)用OPTI-MEM I培養(yǎng)基。關(guān)于對(duì)血清短少比較活絡(luò)的貼壁細(xì)胞，建議運(yùn)用LIPOFECTAMINE 2000。
2、抗生素 比如*和*，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般關(guān)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑添加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染功率低。
3、細(xì)胞代數(shù) 轉(zhuǎn)染前細(xì)胞通過(guò)1-2次傳代保證細(xì)胞成長(zhǎng)旺盛簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)染，留意貼壁細(xì)胞一旦長(zhǎng)滿就不好轉(zhuǎn)染。
4、細(xì)胞鋪板密度 一般轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2*10^6--4*10^6細(xì)胞/ml時(shí)效果較好。保證轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)滿或處于靜止期。鋪板細(xì)胞數(shù)目的添加可以添加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。
5、DNA質(zhì)量 DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染功率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技能依據(jù)電荷吸引原理，假設(shè)DNA不純，如帶少數(shù)的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)明顯影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效構(gòu)成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。
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