1、科研ELISA試劑盒標(biāo)本的采納和保存
可用作科研ELISA試劑盒測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同即是血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、xue塊縮短后即可獲得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)查驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等使用。血清標(biāo)本可按慣例方法收集，應(yīng)留心防止溶血，紅細(xì)胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本或許會增加非特異性顯色。
血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中或許含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其間的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?；鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少數(shù)分裝冰存。保存血清自收集時就應(yīng)留心無菌操縱，也可加進(jìn)適當(dāng)防腐劑。
2、科研ELISA試劑盒試劑的準(zhǔn)備
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備試驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或往離子水，包含用于洗刷的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液使用pH計(jì)丈量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
3、科研ELISA試劑盒加樣
在科研ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不行濺出，不行發(fā)生氣泡。
加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)則的量加進(jìn)板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加進(jìn)稀釋液，再在其間加進(jìn)血清標(biāo)本，然后在微型震動器上震動1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程敏捷完結(jié)。
會員1.png)