1、凱氏定氮法仍然是樹立各個(gè)具體辦法時(shí)選用的參閱規(guī)范辦法。
2、雙縮脲比色法是現(xiàn)在首要推薦的蛋白質(zhì)定量辦法。辦法操作簡(jiǎn)便，盡管雙縮脲試劑有大同不異。其間酒石酸鉀納能夠穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子，含有dian化物作為抗氧化劑。雙縮脲反響生成的復(fù)合物其吸收峰為540nm?？蛇x用*的規(guī)范牛血清白蛋白作為規(guī)范品，經(jīng)稱量，必要時(shí)用凱氏定氮法標(biāo)定。各地質(zhì)控中心提供的混合規(guī)范血清可作為第二參閱，血清用量100μl，在10-120g/L濃度范圍內(nèi)呈杰出線性關(guān)系，批內(nèi)CV值<2%
3、染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合，如氨基黑與考馬亮藍(lán)。這一性質(zhì)除了能夠用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色，亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺陷是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致。考馬亮藍(lán)在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從465nm移向595nm，這一性質(zhì)可用分光光度法來(lái)定量檢測(cè)。
4、選用沉淀反響進(jìn)行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此辦法甚為簡(jiǎn)便，不需特殊儀器，技能關(guān)鍵在于：①選擇試劑濃度及溫度；②混勻技能；③選用的規(guī)范；④待測(cè)標(biāo)本中的蛋白濃度。
5、選用280nm和215/225紫外吸收值，計(jì)算蛋白質(zhì)含量280nm 是由于蛋白質(zhì)分子中存在芳香族氨基酸所致。辦法的特異性和準(zhǔn)確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有攪擾。紫外區(qū)200-225nm是肽健的強(qiáng)吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍，將血清稀釋1000-2000倍能夠消除攪擾物質(zhì)的影響。
6、基于蛋白分子中含有*和*而使用的酚試劑比色法由于各種蛋白質(zhì)分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同，特別是白蛋白含*為0.2%，而γ-球蛋白中含量達(dá)2%-3%，導(dǎo)致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中參加Cu2++，集中原法和雙縮脲反響兩者的效果，使呈色靈敏度進(jìn)步。其間75%的呈色依賴于Cu2++。反響產(chǎn)品吸收峰在650-750nm，辦法靈敏度為雙縮脲辦法的100倍左右。有利于檢測(cè)較微量的蛋白質(zhì)。但試劑反響仍易受多種化合物的攪擾。
7、染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合，如氨基黑與考馬亮藍(lán)。這一性質(zhì)除了能夠用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色，亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺陷是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致?？捡R亮藍(lán)在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從465nm移向595nm，這一性質(zhì)可用分光光度法來(lái)定量檢測(cè)
會(huì)員1.png)