ELISA試劑盒測(cè)定步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加停止液→比色→判定成果。
ELISA試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留意以下5個(gè)方面。
1. 跟著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加停止液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和停止液時(shí)則不需更換吸嘴。
3. 在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留意操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)刻的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時(shí)刻不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不留意可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤成果或定量不準(zhǔn)。
4. 洗刷是ELISA試劑盒操作過(guò)程中決定試驗(yàn)勝敗的一個(gè)關(guān)鍵步驟。意圖是除去未結(jié)合的免疫反響物，停止抗原抗體反響，除去標(biāo)本中與反響無(wú)關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過(guò)程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機(jī)洗板或手藝洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反響孔洗刷作用均一，批內(nèi)、批間差異小，手藝洗板應(yīng)留意操控各孔洗刷作用，差異不宜太大。
5. 判定成果須運(yùn)用ELISA試劑盒測(cè)讀儀，比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)，依據(jù)反響液色彩的不同選用不同波長(zhǎng)的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。
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