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閱讀:88發(fā)布時間:2017-7-17
我司ELISA試劑盒技術(shù)人員跟大家共享了師兄、師姐們對于ELISA試驗中內(nèi)源性物質(zhì)攪擾的處理方案??赐甑耐瑐儯紝W(xué)起來了沒?今天,外源性物質(zhì)攪擾的處理方案,趕緊學(xué)起來!
外源性物質(zhì)攪擾處理方案匯總:
外源性物質(zhì)常常是因為用于ELISA測定的血標本的收集、儲存等不當(dāng)所構(gòu)成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝聚不全和*中增加物等影響。
(1)標本溶血 因為各種人為要素引起的標本溶血,均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為符號的 ELISA 測定中,會致使非特異性顯色,攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果,標本收集時有必要留意防止溶血。
(2)標本受細菌污染 因菌體中可能富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
(3)標本保留不當(dāng) ELISA試劑盒在冰箱中保留過久的標本,血清中 IgG 可聚組成多聚體、AFP 可構(gòu)成二聚體,在間接法 ELISA 測定中會致使本底過深、甚至構(gòu)成假陽性;標本放置時刻過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性削弱,亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA 測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能立即測定,5 天內(nèi)測定的血清標本可存放于 4℃,1 周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不行激烈振蕩。
(4)標本凝聚不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液收集后 1/2~2 h 開端凝結(jié),18~24 h *凝結(jié)。臨床查驗工作中,有時為了爭取時刻迅速檢查,常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清,此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在 ELISA 測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽性成果;這類狀況于次日復(fù)查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為防止上述攪擾效果,處理的方法是血液標本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清,或標本收集時用帶別離膠的*或于*中加入恰當(dāng)?shù)拇倌齽?br />(5)ELISA試劑盒標本管中增加物質(zhì)的影響 抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如 NaN3 可抑制 ELISA 體系中辣根過氧化物酶活性)及迅速別離血清的別離膠等均對 ELISA 測定有必定攪擾效果。 綜上所述,對查驗 ELISA 測定中呈現(xiàn)的假陽性或假陰性成果,在思考試劑要素和操作要素以外,更多的應(yīng)從標本要素方面進行剖析,并應(yīng)采納相應(yīng)措施掃除 攪擾效果,從而為臨床提供準確牢靠的檢查成果。
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