ELISA試劑盒檢查系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段。自個(gè)也為此煩惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間，跟著自個(gè)技術(shù)水平得前進(jìn)，ELISA試劑盒或多或少地也把握了ELISA系統(tǒng)的脾氣，也是熟能生巧吧，如今做方陣，做ELISA已是駕輕就熟了，曾經(jīng)檢查一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，如今給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日根本搞定。但是在新老手操作過(guò)程中老是會(huì)泛起或大或小的標(biāo)題，本人在剛開(kāi)始做ELISA時(shí)就面臨良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是常常做得烏煙瘴氣，比如說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。
包被原的性質(zhì)很首要，蛋白濃度，是不是降解，這到你做出的抗體可不可以被其辨認(rèn)，所以保存抗原很首要，ELISA試劑盒我做重組蛋白時(shí)，師兄都嚴(yán)格警告我必定要在冰浴下緩慢消融即是這個(gè)道理。封閉即是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，然后排擠ELISA后的過(guò)程中攪擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)由于實(shí)驗(yàn)的需求，包被原的特殊性也也許選用中性的緩沖溶液來(lái)包。
ELISA試劑盒常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，對(duì)比價(jià)廉，可以高濃度運(yùn)用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（首要為了掃除類似蛋白攪擾）和酪蛋白等等。具體的實(shí)驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自個(gè)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。但*選用啥，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐。應(yīng)留心以下原理：ELISA試劑盒由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長(zhǎng)短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般富含更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。小分子必需依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原也許不是蛋白，關(guān)于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)咱們要事前對(duì)其改造再加以包被，親和素*:先親和素先包被載體，參加*化的DNA，這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí)，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。常用的包被液除了方才說(shuō)到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
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