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植物安排樣本的先前處理

閱讀:253發(fā)布時(shí)間:2017-4-5

                     植物安排樣本的先前處理                   

1、勻漿介質(zhì)

通常選用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定目標(biāo)的狀況自行設(shè)定濃度,意圖是堅(jiān)持樣本的等滲環(huán)境。
2、安排勻漿的制備
(1)、取安排塊(0.2g~0.5g)起碼可到5~10mg在嚴(yán)寒的PBS中漂洗,濾紙拭干,稱重,放入5ml的勻漿管中。
(2)、按分量(g):體積(ml)=1:4的比例參加4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪趕快剪碎安排塊。
(3)、勻漿的方法:手藝勻漿,機(jī)器勻漿。
① 手藝勻漿:左手持勻漿管將下端刺進(jìn)盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿筆直刺進(jìn)套管中,上下滾動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成20%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿:用安排搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%安排勻漿,也可用內(nèi)切式安排勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)刻10秒/次,間隙30秒,接連3~5次,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延伸勻漿時(shí)刻),
鏡檢調(diào)查:取少數(shù)安排勻漿作涂片(直接涂片、染色均能夠),顯微鏡下調(diào)查細(xì)胞是不是破碎,若沒有則可延伸勻漿時(shí)刻。
(4)、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定.
3、樣本保留:
 植物安排樣本暫時(shí)不測定,可當(dāng)即低溫凍存,溫度越低越好,中心如不重復(fù)凍融,-20℃以下可保留三個(gè)月,-70℃以下可保留六個(gè)月。
 制備好的勻漿液主張不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時(shí)刻過長有關(guān)酶活會(huì)有所降低,部分目標(biāo)4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,總蛋白測定可存5~7天等)


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