ELSIA試劑盒操作過程：
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，十0μL/孔加入聚苯乙烯96孔反響板中。4℃放置。
②洗刷：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗刷液洗3次。
③關(guān)閉：加l00μL/孔關(guān)閉液，室溫放置0.5h.
④洗刷：用洗刷液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(依照1：2或1：十)，十0μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗刷：用洗刷液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用關(guān)閉液l ：8000稀釋，十0μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗刷：用洗刷液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮制造的底物溶液十0μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩停止反響、比色：加50μL/孔停止液。ELISA試劑盒色彩變黃；用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值，陽(yáng)性反響的zui大稀釋度為待測(cè)
樣品的效價(jià)。
一、ELISA試劑盒試驗(yàn)意圖
1、深化了解ELISA法測(cè)定抗體效價(jià)的原理。
2、把握ELISA法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)的辦法。
二、試驗(yàn)原理
ELISA是以免疫學(xué)反響為根底，將抗原、抗體的特異性反響與酶對(duì)底物的催化作用相起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技能。免疫酶技能是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，構(gòu)成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶物。該酶物的酶在免疫反 應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)色彩的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技能的一種，其特點(diǎn)是使用聚苯乙烯微量反響板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反響和酶促反響都在其間進(jìn)行。在每次反響后都要重復(fù)洗 滌，這既確保了反響的定量，也避免了末反響的游離抗體/抗原的分離過程。ELISA試劑盒在ELISA 法中。酶促反響只進(jìn)行一次，而 抗原、抗體的免疫反響可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反響。
現(xiàn)在常用的幾種ELISA辦法有：測(cè)定抗體的直接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本試驗(yàn)選用直接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反響板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗刷以除掉未的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗刷，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿停止酶促反響，用目測(cè)或光電
比色測(cè)定抗體含量。
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