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技術(shù)文章

elisa試劑盒白介素類操作步驟

閱讀:207發(fā)布時間:2017-3-3

elisa試劑盒白介素類操作過程:

1.elisa試劑盒白介素類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~十μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過液。次日洗刷3次。
2.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3.于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui終一遍用DDW洗刷。
4.于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 十~30分鐘
5.于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml
6.elisa試劑盒白介素類可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽性程度越強,陰性反響為無色或極淺,根據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表明。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則4十nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
7.加酶標(biāo)抗體:于各反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗刷。
4.加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 十~30分鐘。
8.停止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
9.成果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽性程度越強,陰性反響為無色或極淺,根據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表明。也可測OD值:elisa試劑盒白介素類檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則4十nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。


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