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技術(shù)文章

剖析影響ELISA試劑盒實驗非特異性顯色剖析

閱讀:114發(fā)布時間:2017-1-19

聚苯乙烯ELISA板由于ELISA試劑盒質(zhì)料的不相同和制造技能的不同,各商品的質(zhì)量差異很大。溶血標(biāo)本,紅細胞溶解決裂,開釋出血紅素構(gòu)成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標(biāo)本也許會增加非特異性顯色。因而,在挑選ELISA試劑盒同時要對其運用的微孔板類型進行認證,評價。試劑盒特異性要素固相載體的挑選,ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為多見。外源性攪擾物,經(jīng)常因樣品收集、貯存、處理不妥形成如樣品溶血,被細菌污染,標(biāo)本凝聚不全等。如在冰箱中保留過久,其間的IgG可發(fā)作聚合,在直接法ELISA中可使本底加深。但由于受方法學(xué)及技能條件的約束,在酶聯(lián)吸附測定中有時不可避免的會泛起必定的非特異性,但咱們能夠經(jīng)過以上辦法把非特異性顯色降至zui低限底,然后前進檢查的特異性,并得到更準(zhǔn)確、牢靠的試驗成果。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)自1971年自面世以來,以其敏感性高,特異性強,操作簡潔、安全,而廣泛應(yīng)用于確診,創(chuàng)始了免疫學(xué)確診。 
綜上所述,由于ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附技能現(xiàn)在在技能上缺少標(biāo)準(zhǔn)化,雖然現(xiàn)在上以及我國有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清(血清盤)。因而,血標(biāo)本在收集處理時應(yīng)當(dāng)心,在冰箱中保留不易過久。在酶聯(lián)免疫測定尤其是直接ELISA中,試劑的特異性取決于運用抗原的純度。ELISA試劑盒標(biāo)本凝聚不全時,血清中會殘留部分纖維蛋白原,也易形成假陽性。檢修標(biāo)本中富含酶符號物的攪擾物,內(nèi)源性攪擾物類風(fēng)濕因子(RF)、黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的本身抗體,多數(shù)為IgM類,能充任抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反響,然后出現(xiàn)非特異性顯色。如有細菌污染,菌體中也許富含內(nèi)源性HRP(辣根過氧化酶),有國內(nèi)報導(dǎo)酶免HBsAg試劑檢查溶血標(biāo)本時可形成假陽性。影響ELISA中非特異性顯色的因素良多,如ELISA試劑盒特異性、檢修標(biāo)本中含酶符號物的攪擾物,操作過程中的標(biāo)題。黃疸血標(biāo)本中常富含內(nèi)源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為符號物,就有也許發(fā)生非特異性顯色。 
現(xiàn)在由于ELISA試劑盒技能條件的約束,包被用抗原或抗體的純度不也許到達100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡也許前進純度,前進特異性。它具有良好的吸附機能,孔底透明度高,空缺值低,各板之間、統(tǒng)一板各孔之間機能相近。ELISA試劑盒但同其它免疫確診方法相同酶免試劑在它的研討、出產(chǎn)及運用中經(jīng)常會遇到非特異性標(biāo)題,這篇文章就在試驗過程中發(fā)生的一些因素及怎么采納一些辦法,消除非特異性顯色作一剖析。這篇文章就這一因素作一簡明剖析,以便能夠經(jīng)過以上辦法把非特異顯色降至zui低極限,然后前進檢查的特異性,并得到更準(zhǔn)確、牢靠的試驗成果。


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