酶放大免疫測定法用于測定半抗原，不需要載體，反應(yīng)在試管中進行。兔ELISA試劑盒當半抗原與酶結(jié)合成酶標半抗原后酶具有活性，但是由于酶標半抗原與抗體結(jié)合后，酶活性受到結(jié)合抗體的影響而被抑制。
操作步驟：
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、兔ELISA試劑盒第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為18 ng/ml，12 ng/ml，6ng/ml，3 ng/ml，1.5 ng/ml）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
大致過程如下：分為參考與待測兩個系統(tǒng)，在參考與待測管中分別加入等量待測酶標半抗原（酶活性），然后在待測管中加入待測半抗原，在參考管中加入等量緩沖液（與待測半抗原量相等），反應(yīng)后，參考管中酶標半抗原全被抗體結(jié)合而使酶活性受抑制，兔ELISA試劑盒待測管中由于待測半抗原的競爭而減少酶標半抗原與抗體結(jié)合的量，從而在加入底物后，待測管顯色，參考管卻不顯色，測定待測管的光密度，就可知待測半抗原的含量。
