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技術(shù)文章

細(xì)胞冷凍技術(shù)

閱讀:418發(fā)布時(shí)間:2015-4-10

    目前,細(xì)胞凍存zui常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍,兔ELISA試劑盒細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。

   慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會,從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。為了得到完整的、高品質(zhì)RNA,在整個(gè)RNA制備過程中,兔ELISA試劑盒當(dāng)RNA離開強(qiáng)蛋白變性劑(如離液裂解液或酚)的保護(hù)時(shí),避免引入新的RNase污染就非常關(guān)鍵。

    由于RNase幾乎是*,所以必須確保與純化的RNA接觸的每一樣?xùn)|西都是無RNase污染的。所有的表面,包括移液器、工作臺、玻璃器皿和制膠設(shè)備,都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過,兔ELISA試劑盒去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。必須保證一直使用無RNase的槍頭、試管和溶液,手套也應(yīng)經(jīng)常更換。

    如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,兔ELISA試劑盒這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點(diǎn)下降,提高細(xì)胞膜對水的通透性,且對細(xì)胞無明顯毒性。


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