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地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠腎胺酶表達的影響＊

柴輝１ 劉斌１ 李應(yīng)東１ 孫少伯１ 朱貝貝１ 趙信科１ 劉凱１

［摘要］   目的：觀察地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）腎胺酶表達的影響，以探討地龍降壓膠囊治療原發(fā)性高血壓的作用機制。方法：取２４只８周齡雄性ＳＨＲ，根據(jù)收縮壓隨機分為模型組  （等容量蒸餾水灌胃）及地龍降壓膠囊高、低劑量組  （分別以地龍降壓膠囊２４０ ｍｇ／ｋｇ、１２０ ｍｇ／ｋｇ 灌胃），每組８ 只。另?。?nbsp;只  ＷＫＹ 雄性大鼠作為正常對照組 （等容量蒸餾水灌胃）。分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２ 周、４ 周、６ 周、８ 周測定尾動脈收縮壓。末次給藥后，采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測大鼠血漿兒茶酚胺和血清腎胺酶含量。采用免疫組織化學法檢測大鼠腎

臟腎胺酶的表達。結(jié)果：地龍降壓膠囊有效降低了 ＳＨＲ 收縮壓、血漿兒茶酚胺水平（Ｐ＜０．０５）；升高了 ＳＨＲ 腎胺酶水平（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：地龍降壓膠囊能有效降低血壓，其作用機制可能是通過調(diào)節(jié)腎胺酶表達水平，從而影響血漿兒茶酚胺水平實現(xiàn)的。

［關(guān)鍵詞］ 地龍降壓膠囊；自發(fā)性高血壓大鼠；交感神經(jīng)；腎胺酶；兒茶酚胺

ｄｏｉ：１０．１３２０１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１４３９．２０１８．０１．０１５

［中圖分類號］  Ｒ５４４．１ ［文獻標志碼］  Ａ

ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ

ＣＨＡＩＨｕｉ  ＬＩＵＢｉｎ  ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ  ＳＵＮＳｈａｏｂｏ ＺＨＵＢｅｉｂｅｉ  ＺＨＡＯＸｉｎｋｅ  ＬＩＵ Ｋａｉ

（ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ，７３００００，Ｃｈｉｎａ）

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ

Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ（ＳＨＲ），ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ２４ｍａｌｅＳＨＲｓｏｆ８ ｗｅｅｋｓｏｌｄ ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ），ｈｉｇｈｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ（２４０ ｍｇ／ｋｇ，１２０ ｍｇ／ｋｇ），８ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ａｎｏｔｈｅｒ８ ＷＫＹ ｍａｌｅｒａｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓ ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ）．Ｔｈｅｃａｒｏｔｉｄｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄａｔ２ｗｅｅｋｓ，４ｗｅｅｋｓ，６ｗｅｅｋｓａｎｄ８ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔａｄｍｉｎｉｓ－ ｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓａｎｄｓｅｒｕｍｒｅｎａｌａｓｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅ ｉｎＫｉｄｎｅｙ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｄｉｌｏｎｇ Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｐｓｕｌｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅ

ＳＨＲｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ（Ｐ＜０．０５）；ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳＨＲｒｅｎａｌａｓｅ （Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｓｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙ

ｂｅｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｒｅｎａｌａｓｅ，ａｎｄｔｈｅｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅ；ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ；ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ；ｒｅｎａｌａｓｅ；ｃａｔｅ－ ｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ

高血壓是以動脈血壓進行性升高為表現(xiàn)的心血管疾病，是心血管疾病重要的危險因素，致殘率、致死率高。有研究認為原發(fā)性高血壓是以交感神經(jīng)過度興奮為起點，引起兒茶酚胺分泌增加，血管收縮，進 而發(fā)生高血壓并持續(xù)進展［１］。Ｍｉｌａｎｉ等［２］研究發(fā)現(xiàn)腎胺酶可以降解兒茶酚胺，進而調(diào)節(jié)

＊ 基金項目：甘肅省自然科學基金（Ｎｏ：１６１０ＲＪＺＡ０６８）；甘肅中醫(yī)藥大學研究生創(chuàng)新基金（Ｎｏ：ＣＸ２０１６－０８）

１ 甘肅中醫(yī)藥大學（蘭州，７３００００）

通信作者：李應(yīng)東，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ

血壓。地龍降壓膠囊是甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，在臨床使用中對高血壓有較好的治療 效果，但是在對其作用機制的實驗研究較少，尚未 發(fā)現(xiàn)有涉及其對交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用。本研究通過觀察地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）血漿兒茶酚胺濃度以及血清腎胺酶水平變化的影響，探討地龍降壓膠囊的降壓作用與影響腎胺酶表 達水平的關(guān)系，為其治療高血壓提供理論基礎(chǔ)和實 驗依據(jù)。

ＣＨＡＩＨｕｉ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲｓ

·６７·

１  材料與方法

１．１  實驗動物

２４只ＳＨＲ 和８只 ＷＫＹＳＰＦ 級大鼠，８ 周齡，雄性，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司， 許可證編號：ＳＣＸＫ （京）２０１２－０００１。

１．２  實驗藥物與試劑

受試藥物：地 龍降壓膠囊（甘 肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，批號：１５１０２６）；試劑：水合氯醛（天津市光復(fù)精細化工研究所，批 號：２０１５０１０５）；４％多聚 甲 醛 （北 京 索 萊 寶 科 技 有 限 公 司，批 號： ２０１６０４２９）；ＲａｔＣＡ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ９６Ｔ（上海恒遠生物科技有限公司，批 號：２０１６０５）；ＲｂａＲｅｎａｌａｓｅ

（北 京 博 奧 森 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司，批 號：ＡＣ ０６０３１７５７）。

１．３  實驗儀器

智能無創(chuàng)血壓計－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）；ＪＭ－Ａ５００２ 型電子天平（諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司）；高 速低溫離心機 （德 國Ｈｅｒａｅｕｓ公司）；微型混合器（金壇市恒豐儀器廠）； Ｉｎｆｉｎｉｔｅ２００ＰＲＯ 序列多功能酶標儀（Ｔｅｃａｎ 奧地利有限責任公司）；ＺＷＹＲ－２４０ 恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器有限公司）；ＥＧ１６００ 型包埋儀（德 國 Ｌｅｉｃａ 公司）；ＲＭ ２１３５ 型切片機 （德 國 Ｌｅｉｃａ公司）；ＯＬＹＭＰＵＳＢＸ５ 顯微鏡（日本 Ｏｌｙｍ－ ｐｕｓ 珠式會社）。

１．４  動物分組及給藥

?。钢荦g雄性ＳＨＲ２４只和８周齡雄性  ＷＫＹ大鼠８只，適應(yīng)性喂養(yǎng)１ 周后，用智能無創(chuàng)血壓計－ 鼠儀ＢＰ－９８Ａ 測量 ＳＨＲ 收縮壓，根據(jù)收縮壓值查隨機數(shù)字表，隨機分為３ 組：模型組、地龍降壓膠囊低劑量組、地龍降壓膠囊高劑量組，每組８ 只。地龍降壓膠囊干預(yù)組，分別以每日地龍降壓膠囊低劑

化檢測。

１．５．３  指標檢測 血漿兒茶酚胺（ＣＡ）、血清腎胺酶（ｒｅｎａｌａｓｅ）水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

１．６  統(tǒng)計學處理

采用ＳＰＳＳ２０．０ 軟件進行統(tǒng)計學處理。數(shù)據(jù)結(jié)果符合正態(tài)分布以ｘ珚±ｓ 表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析 （方差齊的采用 ＬＳＤ 檢驗，

方差不齊者采用 Ｄｕｎｎｅｔｔ'ｔ檢驗），以 Ｐ＜０．０５ 為差異有統(tǒng)計學意義。

２ 結(jié) 果

２．１  地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 收縮壓的影響

與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠收縮壓隨鼠齡增

加逐漸升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組相比，隨著給藥時間的延長，地龍降壓膠囊高劑量組給藥第４ 周收縮

壓下降有統(tǒng)計學差異（Ｐ＜０．０５），地龍降壓膠囊低劑量組給藥第６ 周收縮壓下降有統(tǒng)計學差異  （Ｐ＜ ０．０５）；地龍降壓膠囊高、低劑量組之間的差異無統(tǒng)

計學意義（Ｐ＞０．０５）。見表１。

２．２  地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 血漿兒茶酚胺水平、血

清腎胺酶水平的影響

與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血漿兒茶酚胺水

平升高，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，地龍降壓膠囊高、低劑量組大鼠血漿兒茶酚胺

水平均降低（Ｐ＜０．０５）。給藥８ 周后，與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血清腎胺酶水平降低，差異有統(tǒng)

計學意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中腎胺酶水平均升高，差異有統(tǒng)計學意義  （Ｐ

＜０．０５）；其中以高劑量組差異顯著。見表２。

表２ 地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 兒茶酚胺和腎胺酶水平的影響

Ｔａｂｌｅ２ ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎ

量組１２０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量的等效劑量）、地龍降壓膠囊高劑量組２４０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量等效劑量的２倍）灌胃。模型組給予等體積的蒸餾水灌

ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅａｎｄｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲ

兒茶酚胺

分組

／（μｇ·Ｌ－１）

ｘ珚±ｓ

腎胺酶

／（μｇ·ｍｌ－１）

胃。另取 ＷＫＹ 雄 性 大 鼠 ８ 只 作 為 正 常 對 照

（ＷＫＹ 組），給予等體積的蒸餾水灌胃。所有大鼠每日灌胃１次，藥物干預(yù)８周。

１．５  檢測指標

１．５．１  一般情況及收縮壓監(jiān)測     分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２周、４ 周、６ 周、８ 周測定大鼠動脈血壓。動脈血壓用智能無創(chuàng)血壓計－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ，采用尾套法，給每只大鼠連續(xù)測量血壓５ 次，取平均值作為測量結(jié)果。

１．５．２  樣品采集及處理      干預(yù) ８ 周實驗結(jié)束后，夜 間禁食，次 日清晨腹腔注射 １０％ 水合氯醛（３ ｍｌ／ｋｇ）麻 醉，心 臟采血 ４ ｍｌ后 分離血清用于血清學檢測；脫 頸椎處死后剖腹摘取完整左側(cè)腎臟用４％ 多聚甲醛固定４８ｈ 后行免疫組

ＷＫＹ 組 ７０．９７±１４．４６   ４．３９±０．３４

模型組 １２４．８４±１７．５１１）   １．７６±０．２９１）地龍降壓膠囊高劑量組     ９０．０９±１２．４４２）   ４．３７±０．２５２）地龍降壓膠囊低劑量組     ９２．５８±１１．８４２）   ２．９３±０．５９１）２）

與  ＷＫＹ 組比較，１）Ｐ ＜０．０５；與 模型組比較，２）Ｐ ＜

０．０５。

２．３  腎臟腎胺酶的表達

免疫組化顯示，ＷＫＹ 組大鼠腎胺酶在近端小管中高度表達，也存在于腎小球和遠端小管中（棕黃色顆粒，以下同地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠腎胺酶表達的影響＊

柴輝１ 劉斌１ 李應(yīng)東１ 孫少伯１ 朱貝貝１ 趙信科１ 劉凱１

［摘要］   目的：觀察地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）腎胺酶表達的影響，以探討地龍降壓膠囊治療原發(fā)性高血壓的作用機制。方法：?。玻粗唬钢荦g雄性ＳＨＲ，根據(jù)收縮壓隨機分為模型組  （等容量蒸餾水灌胃）及地龍降壓膠囊高、低劑量組  （分別以地龍降壓膠囊２４０ ｍｇ／ｋｇ、１２０ ｍｇ／ｋｇ 灌胃），每組８ 只。另?。?nbsp;只  ＷＫＹ 雄性大鼠作為正常對照組 （等容量蒸餾水灌胃）。分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２ 周、４ 周、６ 周、８ 周測定尾動脈收縮壓。末次給藥后，采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測大鼠血漿兒茶酚胺和血清腎胺酶含量。采用免疫組織化學法檢測大鼠腎

臟腎胺酶的表達。結(jié)果：地龍降壓膠囊有效降低了 ＳＨＲ 收縮壓、血漿兒茶酚胺水平（Ｐ＜０．０５）；升高了 ＳＨＲ 腎胺酶水平（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：地龍降壓膠囊能有效降低血壓，其作用機制可能是通過調(diào)節(jié)腎胺酶表達水平，從而影響血漿兒茶酚胺水平實現(xiàn)的。

［關(guān)鍵詞］ 地龍降壓膠囊；自發(fā)性高血壓大鼠；交感神經(jīng)；腎胺酶；兒茶酚胺

ｄｏｉ：１０．１３２０１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１４３９．２０１８．０１．０１５

［中圖分類號］  Ｒ５４４．１ ［文獻標志碼］  Ａ

ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ

ＣＨＡＩＨｕｉ  ＬＩＵＢｉｎ  ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ  ＳＵＮＳｈａｏｂｏ ＺＨＵＢｅｉｂｅｉ  ＺＨＡＯＸｉｎｋｅ  ＬＩＵ Ｋａｉ

（ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ，７３００００，Ｃｈｉｎａ）

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ

Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ（ＳＨＲ），ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ２４ｍａｌｅＳＨＲｓｏｆ８ ｗｅｅｋｓｏｌｄ ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ），ｈｉｇｈｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ（２４０ ｍｇ／ｋｇ，１２０ ｍｇ／ｋｇ），８ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ａｎｏｔｈｅｒ８ ＷＫＹ ｍａｌｅｒａｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓ ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ）．Ｔｈｅｃａｒｏｔｉｄｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄａｔ２ｗｅｅｋｓ，４ｗｅｅｋｓ，６ｗｅｅｋｓａｎｄ８ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔａｄｍｉｎｉｓ－ ｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓａｎｄｓｅｒｕｍｒｅｎａｌａｓｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅ ｉｎＫｉｄｎｅｙ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｄｉｌｏｎｇ Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｐｓｕｌｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅ

ＳＨＲｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ（Ｐ＜０．０５）；ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳＨＲｒｅｎａｌａｓｅ （Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｓｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙ

ｂｅｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｒｅｎａｌａｓｅ，ａｎｄｔｈｅｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅ；ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ；ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ；ｒｅｎａｌａｓｅ；ｃａｔｅ－ ｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ

高血壓是以動脈血壓進行性升高為表現(xiàn)的心血管疾病，是心血管疾病重要的危險因素，致殘率、致死率高。有研究認為原發(fā)性高血壓是以交感神經(jīng)過度興奮為起點，引起兒茶酚胺分泌增加，血管收縮，進 而發(fā)生高血壓并持續(xù)進展［１］。Ｍｉｌａｎｉ等［２］研究發(fā)現(xiàn)腎胺酶可以降解兒茶酚胺，進而調(diào)節(jié)

＊ 基金項目：甘肅省自然科學基金（Ｎｏ：１６１０ＲＪＺＡ０６８）；甘肅中醫(yī)藥大學研究生創(chuàng)新基金（Ｎｏ：ＣＸ２０１６－０８）

１ 甘肅中醫(yī)藥大學（蘭州，７３００００）

通信作者：李應(yīng)東，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ

血壓。地龍降壓膠囊是甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，在臨床使用中對高血壓有較好的治療 效果，但是在對其作用機制的實驗研究較少，尚未 發(fā)現(xiàn)有涉及其對交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用。本研究通過觀察地龍降壓膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）血漿兒茶酚胺濃度以及血清腎胺酶水平變化的影響，探討地龍降壓膠囊的降壓作用與影響腎胺酶表 達水平的關(guān)系，為其治療高血壓提供理論基礎(chǔ)和實 驗依據(jù)。

ＣＨＡＩＨｕｉ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲｓ

·６７·

１  材料與方法

１．１  實驗動物

２４只ＳＨＲ 和８只 ＷＫＹＳＰＦ 級大鼠，８ 周齡，雄性，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司， 許可證編號：ＳＣＸＫ （京）２０１２－０００１。

１．２  實驗藥物與試劑

受試藥物：地 龍降壓膠囊（甘 肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，批號：１５１０２６）；試劑：水合氯醛（天津市光復(fù)精細化工研究所，批 號：２０１５０１０５）；４％多聚 甲 醛 （北 京 索 萊 寶 科 技 有 限 公 司，批 號： ２０１６０４２９）；ＲａｔＣＡ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ９６Ｔ（上海恒遠生物科技有限公司，批 號：２０１６０５）；ＲｂａＲｅｎａｌａｓｅ

（北 京 博 奧 森 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司，批 號：ＡＣ ０６０３１７５７）。

１．３  實驗儀器

智能無創(chuàng)血壓計－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）；ＪＭ－Ａ５００２ 型電子天平（諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司）；高 速低溫離心機 （德 國Ｈｅｒａｅｕｓ公司）；微型混合器（金壇市恒豐儀器廠）； Ｉｎｆｉｎｉｔｅ２００ＰＲＯ 序列多功能酶標儀（Ｔｅｃａｎ 奧地利有限責任公司）；ＺＷＹＲ－２４０ 恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器有限公司）；ＥＧ１６００ 型包埋儀（德 國 Ｌｅｉｃａ 公司）；ＲＭ ２１３５ 型切片機 （德 國 Ｌｅｉｃａ公司）；ＯＬＹＭＰＵＳＢＸ５ 顯微鏡（日本 Ｏｌｙｍ－ ｐｕｓ 珠式會社）。

１．４  動物分組及給藥

取８周齡雄性ＳＨＲ２４只和８周齡雄性  ＷＫＹ大鼠８只，適應(yīng)性喂養(yǎng)１ 周后，用智能無創(chuàng)血壓計－ 鼠儀ＢＰ－９８Ａ 測量 ＳＨＲ 收縮壓，根據(jù)收縮壓值查隨機數(shù)字表，隨機分為３ 組：模型組、地龍降壓膠囊低劑量組、地龍降壓膠囊高劑量組，每組８ 只。地龍降壓膠囊干預(yù)組，分別以每日地龍降壓膠囊低劑

化檢測。

１．５．３  指標檢測 血漿兒茶酚胺（ＣＡ）、血清腎胺酶（ｒｅｎａｌａｓｅ）水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

１．６  統(tǒng)計學處理

采用ＳＰＳＳ２０．０ 軟件進行統(tǒng)計學處理。數(shù)據(jù)結(jié)果符合正態(tài)分布以ｘ珚±ｓ 表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析 （方差齊的采用 ＬＳＤ 檢驗，

方差不齊者采用 Ｄｕｎｎｅｔｔ'ｔ檢驗），以 Ｐ＜０．０５ 為差異有統(tǒng)計學意義。

２ 結(jié) 果

２．１  地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 收縮壓的影響

與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠收縮壓隨鼠齡增

加逐漸升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組相比，隨著給藥時間的延長，地龍降壓膠囊高劑量組給藥第４ 周收縮

壓下降有統(tǒng)計學差異（Ｐ＜０．０５），地龍降壓膠囊低劑量組給藥第６ 周收縮壓下降有統(tǒng)計學差異  （Ｐ＜ ０．０５）；地龍降壓膠囊高、低劑量組之間的差異無統(tǒng)

計學意義（Ｐ＞０．０５）。見表１。

２．２  地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 血漿兒茶酚胺水平、血

清腎胺酶水平的影響

與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血漿兒茶酚胺水

平升高，差異有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，地龍降壓膠囊高、低劑量組大鼠血漿兒茶酚胺

水平均降低（Ｐ＜０．０５）。給藥８ 周后，與  ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血清腎胺酶水平降低，差異有統(tǒng)

計學意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中腎胺酶水平均升高，差異有統(tǒng)計學意義  （Ｐ

＜０．０５）；其中以高劑量組差異顯著。見表２。

表２ 地龍降壓膠囊對ＳＨＲ 兒茶酚胺和腎胺酶水平的影響

Ｔａｂｌｅ２ ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎ

量組１２０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量的等效劑量）、地龍降壓膠囊高劑量組２４０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量等效劑量的２倍）灌胃。模型組給予等體積的蒸餾水灌

ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅａｎｄｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲ

兒茶酚胺

分組

／（μｇ·Ｌ－１）

ｘ珚±ｓ

腎胺酶

／（μｇ·ｍｌ－１）

胃。另取 ＷＫＹ 雄 性 大 鼠 ８ 只 作 為 正 常 對 照

（ＷＫＹ 組），給予等體積的蒸餾水灌胃。所有大鼠每日灌胃１次，藥物干預(yù)８周。

１．５  檢測指標

１．５．１  一般情況及收縮壓監(jiān)測     分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２周、４ 周、６ 周、８ 周測定大鼠動脈血壓。動脈血壓用智能無創(chuàng)血壓計－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ，采用尾套法，給每只大鼠連續(xù)測量血壓５ 次，取平均值作為測量結(jié)果。

１．５．２  樣品采集及處理      干預(yù) ８ 周實驗結(jié)束后，夜 間禁食，次 日清晨腹腔注射 １０％ 水合氯醛（３ ｍｌ／ｋｇ）麻 醉，心 臟采血 ４ ｍｌ后 分離血清用于血清學檢測；脫 頸椎處死后剖腹摘取完整左側(cè)腎臟用４％ 多聚甲醛固定４８ｈ 后行免疫組

ＷＫＹ 組 ７０．９７±１４．４６   ４．３９±０．３４

模型組 １２４．８４±１７．５１１）   １．７６±０．２９１）地龍降壓膠囊高劑量組     ９０．０９±１２．４４２）   ４．３７±０．２５２）地龍降壓膠囊低劑量組     ９２．５８±１１．８４２）   ２．９３±０．５９１）２）

與  ＷＫＹ 組比較，１）Ｐ ＜０．０５；與 模型組比較，２）Ｐ ＜

０．０５。

２．３  腎臟腎胺酶的表達

免疫組化顯示，ＷＫＹ 組大鼠腎胺酶在近端小管中高度表達，也存在于腎小球和遠端小管中（棕黃色顆粒，以下同）。模型組大鼠腎胺酶在近端小管、遠端小管、腎小球表達較 ＷＫＹ 組明顯減少；地龍降壓膠囊各劑量組與模型組比較，腎胺酶表達均有不同程度增加。見圖１。

）。模型組大鼠腎胺酶在近端小管、遠端小管、腎小球表達較 ＷＫＹ 組明顯減少；地龍降壓膠囊各劑量組與模型組比較，腎胺酶表達均有不同程度增加。見圖１。