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    為了得到更好的實驗結(jié)果，一些ELISA實驗新手們還需多加了解技術(shù)內(nèi)容，上海恒遠生物公司每周都會為您精心整理出重點技術(shù)要領(lǐng)，能夠熟練的掌握好這些之后再應(yīng)用到實驗里面就會簡單的多。下面來看看今天的重點內(nèi)容：ELISA實驗技術(shù)點。
    
樣本加樣方法
1、細(xì)胞上清：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。
2、腦脊液：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。
3、血清血漿：請加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標(biāo)本,如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100ul。
A.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
B.血漿標(biāo)本，推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測，標(biāo)本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復(fù)凍融。
C.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。
E.請勿使用溶血，高血脂或污染的標(biāo)本檢測，否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。
4、組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解，造成檢測結(jié)果的值偏低。
    因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實驗參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進行，否則就會影響實驗結(jié)果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標(biāo)本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100ul。
    因為目標(biāo)蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關(guān)文獻，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。
             
檢測范圍及靈敏度相關(guān)問題
1、不同廠家的試劑盒的檢測范圍并不相同，一般說來，診斷試劑的檢測范圍以ng/ml計。而常見的科研試劑盒中的樣本中的目標(biāo)蛋白，范圍可隨樣本的類型而變化。所以實驗前應(yīng)通過文獻和預(yù)實驗的方法確定樣本是否在所購試劑盒的范圍內(nèi)，如果不在檢測范圍內(nèi)，分兩種情況對待。
A.如果樣本中目標(biāo)蛋白太低，需找相應(yīng)靈敏度更高的試劑盒來檢測或濃縮樣本；
B.如果樣本中目標(biāo)蛋白太高，則需要進一步稀釋后進行檢測
2、靈敏度的問題
    一般說來，如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。一般來說，試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
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