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    在ELISA實(shí)驗(yàn)中，顯色與比色是萬(wàn)萬(wàn)不可忽略的一個(gè)方面。在本月初時(shí)，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)專員特別為2014年試劑盒的使用做出了總結(jié)與分析。今天我們主要針對(duì)ELISA顯示與比色，一起來(lái)看本年度ELISA試劑盒年末資料總結(jié)大放送。
    ELISA通過(guò)顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出可溶性蛋白總量。ELISPOT也是通過(guò)顯色反應(yīng)，在細(xì)胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn)，可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助的分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個(gè)斑點(diǎn)代表1個(gè)細(xì)胞，從而計(jì)算出分泌該蛋白的細(xì)胞的頻率。由于是單細(xì)胞水平檢測(cè)，ELISPOT比ELISA更靈敏，能從20萬(wàn)-30萬(wàn)細(xì)胞中檢出1個(gè)分泌該蛋白的細(xì)胞。捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，在研究者以刺激劑激活細(xì)胞時(shí)，不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。   

    比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪凈，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔和空白孔，以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行計(jì)算。
    比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度，兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角。

相關(guān)問(wèn)題分析：
1. 酶結(jié)合物的稀釋液
    在稀釋液中常加入高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑。
2. 正確稀釋酶結(jié)合物 
    酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，濃度過(guò)高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過(guò)低則會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性信號(hào)的減弱。酶結(jié)合物在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長(zhǎng)期保存，因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失活。