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恒遠(yuǎn)整理相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品:我們重點(diǎn)來看其制備與鑒定的方法是怎樣的
閱讀:2195 發(fā)布時(shí)間:2014-3-18 周年*開始一星期了,已經(jīng)有朋友們開始訂購試劑盒啦,我公司專業(yè)代理試劑盒、培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品等,今天恒遠(yuǎn)整理相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品:我們重點(diǎn)來看其制備與鑒定的方法是怎樣的。
標(biāo)準(zhǔn)品的制備
1、基質(zhì)的制備:
如前所述,作為標(biāo)準(zhǔn)品的介質(zhì)成分應(yīng)與被測(cè)樣品相同。對(duì)大多數(shù)用于測(cè)定血清中某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)用不含被測(cè)物質(zhì)的零血清制備,以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當(dāng)。但有時(shí)零值血清的制備十分困難,所以有些標(biāo)準(zhǔn)品用適當(dāng)?shù)木彌_液制備,并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白,以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。
零值血清的制備方法有:
① 吸附法:血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸、甲狀腺素等,可用活性炭吸附去除。這種方法簡(jiǎn)便,但待測(cè)物質(zhì)難以清除干凈,而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進(jìn)行制備。
② 反復(fù)凍融法:對(duì)大分子活性物質(zhì)可選用低值血清,經(jīng)反復(fù)凍融使被測(cè)物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活,但也難以得到真正的零值血清。
③ 親和層析法:用特異性抗體制備親和層析柱,用以吸附被測(cè)抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清,但本法比較復(fù)雜而且成本也高。
2、標(biāo)準(zhǔn)物純品的選擇:應(yīng)選擇高化學(xué)純和高免疫純的純品作標(biāo)準(zhǔn)品。其中免疫純尤為重要,在標(biāo)準(zhǔn)品中不應(yīng)含有與被測(cè)物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的制備:先用零值血清配置高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的要求,用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度,制成符合預(yù)定要求的,由不同濃度組成的系列標(biāo)準(zhǔn)品。
鑒定
1、免疫活性的鑒定
選用高特異性的抗血清分別作*標(biāo)準(zhǔn)品的待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線,并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行,說明兩種物質(zhì)對(duì)同一抗體有相同的親和力,即二者是同質(zhì)性物質(zhì)。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行,說明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性,因而這一待鑒定的標(biāo)準(zhǔn)品是不能使用的。
2、濃度的標(biāo)定
已鑒定過的,免疫活性合格的標(biāo)準(zhǔn)品,與*的標(biāo)準(zhǔn)品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線。此時(shí),兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的。如果兩者平行但不重合,則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量計(jì)算二者的換算系數(shù),然后調(diào)整待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,直至使兩條劑量反應(yīng)曲線*或基本重合為止。
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