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*，免疫測定的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)。以前，用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后所獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑已成為現(xiàn)實，各種新型實用的測定方法不斷出現(xiàn)。

    1．基因工程抗原  較早用于免疫測定的基因工程抗原是乙型肝炎病毒核心抗原（HB—：Ag）和乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg），這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和吭HBe的測定問題，因為要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原是較為困難的，并且這一點對于難于培養(yǎng)的病原微生物來說，具有共性。如乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）、丙型旰炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）和梅毒螺旋體等。

    zui早在HIV抗體免疫測定中所使用的HIV抗原為用去垢劑裂解HIV感染的細(xì)胞后所提取的病毒抗原，這樣得到的抗原純度相對較差，因此，影響測定的特異性和敏感性?，F(xiàn)在國內(nèi)外用于HIV抗體檢測的酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）均使用基因工程抗原如gp41，gpl20，gpl60等，大大提高了測定的特異性和敏感性。

    HCV目前尚不能體外培養(yǎng)，只能用基因工程或化學(xué)合成的方法獲得HCV結(jié)構(gòu)區(qū)和非結(jié)陶區(qū)的各種抗原片段，已知HCV基因組由7個功能區(qū)組成：核心，E1，E2／NSl，NSz，NSa，NS4和NSs區(qū)。合成肽抗原的優(yōu)點是易于純化，特異性好，但由于其片段短，分子量小，可能會缺乏立體構(gòu)型決定簇，而基因工程抗原覆蓋抗原位點多，抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。*代抗HCV ELISA試劑盒所使用的HCV抗原為在酵母中表達(dá)的Qoo-a抗原，其為克隆的HCV幾個片段與過氧化物歧化酶（SOD）基因融合后的產(chǎn)物，測定的特異性和靈敏度均較差．第二代試劑則主要以病毒核心區(qū)（C2。）及NSa區(qū)抗原（Caac）為主，亦有NS4區(qū)（C5…1+和Cio。）抗原，C22和C,ac早期檢測能力及靈敏度和特異性方面均優(yōu)于Qoo-a抗原。第三代試劑比第二代試劑更靈敏，更特異。適當(dāng)降低了易產(chǎn)生非特異交叉反應(yīng)的C：：抗原的比例，相應(yīng)增加了C3ac的比例；此外，還增加了NS5區(qū)抗原。zui近，美國Chiron公司Chien等研制了一種包括HCV基因組7個功能區(qū)所有免疫決定基的單一融合蛋白，稱為多決定基融合抗原—6（mutiple-epitopefusionantigen，ME—FA-6），使用該融合蛋白建立的化學(xué)發(fā)光免疫測定方法，其測定敏感性較使用由NSa—NS4—核心（C2，）區(qū)組成的融合蛋白所建立的酶免疫測定方法要高2—4倍。

    臨床上zui常用的梅毒抗體血清學(xué)試驗是快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（rapidplasmarea—

gindrciecardtest，RPR）．RPR是以牛心磷脂作為抗原，測定的是梅毒非特異性抗體。而驗證試驗——螺旋體血球凝集試驗（treponemalpallidumhemagglutinationassay，TPHA）則使用梅毒螺旋體裂解抗原。凝集反應(yīng)試驗一般測定的靈敏度較差，但由于病原體裂解抗原純度較差，難于建立特異性和靈敏度均好的ELISA方法。因此，近年來，不少研究者采用基因工程技術(shù)重組表達(dá)了梅毒螺旋體的具有高度免疫原性的膜脂蛋白TpNl7，TpN44．5（TmpA）和TpN47等，用其建立梅毒抗體檢測的ELISA方法，表現(xiàn)了很好的測定特異性和敏感性，將已成為取代RPR的梅毒抗體理想的篩查試驗。