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恒遠(yuǎn)告訴大家：關(guān)于WB實驗的常見問題以及解決方案（4）

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家生物技術(shù)企業(yè)，主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。并代理銷售Omega、Sigma、R&D、ATCC、HYCLONE等二十多家國外，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實驗需求。

31、一抗，二抗的比例是否重要？
答：比較重要，調(diào)整好一抗，二抗的比例，可以去掉部分非特異的本底。
32、要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？
答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗。
33、免疫組化和Western Blot可以用同一種抗體嗎？
答：免疫組化時抗體識別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時用于免疫組化和Western，而如果抗體識別構(gòu)象形表位，則只能用于免疫組化。
34、Western Blot 中抗體的可以重復(fù)應(yīng)用嗎？
答：抗體工作溶液一般不主張儲存反復(fù)使用，但是如抗體比較珍貴，可反復(fù)使用2－3次。稀釋后應(yīng)在2－3天內(nèi)使用，4度保存，避免反復(fù)凍融。
35、在做Western Blot時，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？
答：PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負(fù)電的蛋白質(zhì)結(jié)合，做小分子的蛋白轉(zhuǎn)移時多加甲醇也是這個目的。
36、檢測同一抗體的磷酸化和非磷酸化的抗原可以在同一張膜上嗎？
答：可以。
37、轉(zhuǎn)膜后經(jīng)麗春紅染色的條帶，為什么大蛋白分子的一端的轉(zhuǎn)膜好象不是很好，為什么？
答：這是正常的，大分子的蛋白轉(zhuǎn)移的慢， 你延長轉(zhuǎn)移時間和電流，大分子一端就會好的多，但是小分子的就有可能會變淡。
38、做Western Blot時，同樣的抗體免疫組化能做出，而Western Blot卻不能？
答：這多半是抗體的問題，要看抗體的說明，是否能做Western Blot和免疫組化。
39、如果是6×8轉(zhuǎn)印膜，要加多少一抗？
答：一抗的稀釋度是有說明的，根據(jù)你的一抗看看就知道了，但是那么大的膜孵育體積一般zui少為3－5ml。
40、上下槽緩沖液有何要求，怎樣才能達到*效果。
答：無特殊要求。但我們一般是上槽放新鮮的緩沖液，下槽可以是重復(fù)使用過一兩次的緩沖液。
如果你想了解更多關(guān)于western blot的信息，來函！