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收到細胞后的處理方法
閱讀:2841 發(fā)布時間:2017-7-20不管是有經(jīng)驗或是剛剛從事細胞培養(yǎng)工作的人員都應(yīng)該認真仔細地詢問下細胞提供方提供的建議,提前了解所要培養(yǎng)細胞的詳細資料,準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑。zui近好多客戶打來,問到有關(guān)細胞在收到后應(yīng)該怎么處理的正確方法,今天我們恒遠生物科技就針對這個問題提出以下一些建議:
1.收到細胞,時間要鏡檢:觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度,有疑議及時咨提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。
2.當(dāng)通過上一步的觀察,細胞初步?jīng)]有任何問題時,進行下一步操作。當(dāng)收到的細胞密達到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調(diào)整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3.如果經(jīng)步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細胞類型,一次少傳些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞,次處理也可以依照第二種情況。
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