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恒遠(yuǎn)公司技術(shù)支招:如何整理酶標(biāo)儀得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
閱讀:1600 發(fā)布時(shí)間:2015-12-3酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。 測(cè)定一般要求測(cè)試液的zui終體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。
光通過被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測(cè)單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度。
OD值公式計(jì)算:
c為檢測(cè)物的濃度 b為檢測(cè)物的厚度 a為摩爾因子
在特定波長下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測(cè),稱為測(cè)量波長。
檢測(cè)值計(jì)算
儀器中的檢測(cè)器接收透過被檢測(cè)物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào),zui大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中,檢測(cè)物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計(jì)算如下:
T=(Meas-Min)/(Max-Min)
其中T為透光值, Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:
MaX=3600
Min=20
Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=log(1/T)=log(1/0.0028)=2.552