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趙老師是鄭州大學(xué)在校研究生，老師在我司買了相應(yīng)的抗體自己包被ELISA試劑盒。也是剛剛接觸ELISA實驗的新手，研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實驗，做完大鼠γ干擾素ELISA實驗后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時間延長（大概6、7分鐘）以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測得的值梯度就沒有了。特咨詢我司技術(shù)幫忙分析原因所在。

我司技術(shù)分析：

1、剛加完顯色劑時梯度明顯：顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。

2、酶濃度太高，導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的

3、包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強，或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠，

4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì)，沒洗下來。

5、建議：包被、酶標(biāo)重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優(yōu)化靈敏度，zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍

6、有條件的話，可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上，加完底物三分鐘讀數(shù)。

7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話，顯色十分鐘就差不多了。

8、酶是自己標(biāo)的這種情況的，HRP比例不要太高。