檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..需要而未提供

產(chǎn)品全稱：GKRP 檢測試劑盒

英文名稱：GKRP ELISA Kit

產(chǎn)品貨號：A097846

規(guī)格：48T/96T

服務(wù)：公司產(chǎn)品僅用于科研可提供免費(fèi)代測服務(wù)，以及產(chǎn)品說明書和技術(shù)指導(dǎo)等

保存環(huán)境：2-8℃低溫、避光、防潮

主要成分：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等

試劑盒組成及試劑配制 ：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

大鼠磷肌3激(PI3K)檢測試劑盒鈉溶液(10%)二雙十八烷化銨 97%2-苯 98%

大鼠蛋白激B(PKB)檢測試劑盒多聚賴氨溶液(1×PLL,0.1mg/ml)N-乙-N-(3-磺)-3-氧苯鈉鹽 99%1,3-二(4-氨苯氧)苯 98%

大鼠蛋白激B(PKB)檢測試劑盒多聚賴氨溶液(10×PLL,1mg/ml)十六烷二乙 98%2-吡啶 98%

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)檢測試劑盒多聚賴氨溶液(10×PLL,1mg/ml)N-乙-N-（3-磺）-3-鈉鹽 98%對氨苯叔丁酯 98%

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)檢測試劑盒非特異結(jié)合性封閉液N-乙-N-(2-羥-3-磺)-3-氧苯鈉鹽 99%3,5-二氨三氟苯 98%

大鼠血紅氧合2(HO-2)檢測試劑盒過氧化物封閉液(H2O2法)N-乙-N-（3-磺）苯鈉鹽 99%4-叔丁環(huán)己 98%

大鼠血紅氧合2(HO-2)檢測試劑盒性磷封閉液(Levamisole法)2-乙己氧 99%間三氟苯 99%

大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)檢測試劑盒性磷封閉液(乙法)固藍(lán)B 90%2-乙酰吡啶 98%

大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)檢測試劑盒性磷封閉液(100×)固黑K鹽 80%2-乙酰-2-噻唑啉 97%

大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)檢測試劑盒內(nèi)源性鏈親和封閉液固深紅 GBC 90%魚腥草 98%

大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)檢測試劑盒內(nèi)源性封閉液(H2O2法)固紅 KL鹽 Biological stain,含量90%3-巰 96%

大鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒內(nèi)源性抑制劑(冰凍切片)固紅RC 生化試劑級乙糠硫酯 99%

大鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒內(nèi)源性親和封閉液固紅 RL Biological stain糠二硫 98%

大鼠吡啶交聯(lián)物(PY)檢測試劑盒內(nèi)源性封閉液固紅B 90%1-己硫 96%

大鼠吡啶交聯(lián)物(PY)檢測試劑盒內(nèi)源性清除液(1×)固紅TR半化鋅鹽 90%3--3-戊 98%

大鼠骨橋(OPN)檢測試劑盒內(nèi)源性親和-封閉試劑盒固紅-萘磺 TR 95%2-丁硫 95%
GKRP 檢測試劑盒無水硫鈉(農(nóng)殘級)磷化絲裂原活化蛋白激磷-1抗體鈀碳加氫催化劑

無水硫鈉(農(nóng)殘級)磷化絲裂原活化蛋白激磷-1抗體偶氮脒類引發(fā)劑V30

無水硫鈉(for HPLC,≥99.0%(T))絲氨/蘇氨蛋白激MLK3抗體偶氮脒類引發(fā)劑V30

無水硫鈉(for HPLC,≥99.0%(T))磷化絲氨/蘇氨蛋白激MLK3抗體偶氮脒類引發(fā)劑V50

碳?xì)溻c(for HPLC,≥99.0%)有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激1抗體偶氮脒類引發(fā)劑V50

硅油II(色譜固定液，200℃++)磷化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激1抗體偶氮

操作流程：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。