一、細胞基本屬性

細胞名稱：小鼠前脂肪細胞

組織來源：脂肪組織

種屬來源：小鼠

細胞簡介：小鼠前脂肪細胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構(gòu)成，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細胞；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞。前脂肪細胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細胞呈圓形，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化前體細胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系。前脂肪細胞是一種類成纖維細胞，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì)，終成為成熟的脂肪細胞。前脂肪細胞對外界機械損傷的抵抗力較強，可望成為軟組織缺損的有益填充物。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

二、使用方法：

小鼠前脂肪細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳可傳3-5代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

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細胞培養(yǎng)注意事項：

公司產(chǎn)品僅用于科研關(guān)于原代細胞培養(yǎng)的注意事項。原代細胞培養(yǎng)是一項非常重要的實驗技術(shù)，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關(guān)鍵。一定要保持操作環(huán)境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養(yǎng)基和血清也很重要。不同細胞對培養(yǎng)基和血清的需求不同，所以要根據(jù)細胞類型來選擇合適的培養(yǎng)基和血清。

另外，也是細胞培養(yǎng)中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養(yǎng)過程中，靜置培養(yǎng)也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應(yīng)新環(huán)境，所以在這段時間內(nèi)要避免頻繁取出培養(yǎng)瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當(dāng)。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導(dǎo)致細胞損傷加重，影響細胞培養(yǎng)成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。