檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..需要而未提供

產(chǎn)品全稱：ET-1 檢測(cè)試劑盒

英文名稱：ET-1 ELISA Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：A097958

規(guī)格：48T/96T

服務(wù)：公司產(chǎn)品僅用于科研可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，以及產(chǎn)品說明書和技術(shù)指導(dǎo)等

保存環(huán)境：2-8℃低溫、避光、防潮

主要成分：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等

試劑盒組成及試劑配制 ：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

雞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)檢測(cè)試劑盒6-磷葡萄糖鋇鹽4-溴乙苯 99%0.95

雞L苯氨解氨(PAL)檢測(cè)試劑盒 6-磷葡萄糖鋇鹽4-氧-α－溴代苯乙 98%黃豆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥96%

雞L苯氨解氨(PAL)檢測(cè)試劑盒 鹽氨葡萄糖3-溴噻吩 97%黃豆 95%

雞煙酰腺二核磷(NADPH)檢測(cè)試劑盒 鹽氨葡萄糖2-溴-3-噻吩 99%2,6-二-3-硝吡啶 97%

雞煙酰腺二核磷(NADPH)檢測(cè)試劑盒 鹽氨葡萄糖3-溴苯 99%二氫辣椒 分析標(biāo)準(zhǔn)品

雞B因子(BF)檢測(cè)試劑盒N-乙酰-D-氨葡萄糖3-溴苯 98%二氫辣椒 90%

雞B因子(BF)檢測(cè)試劑盒N-乙酰-D-氨葡萄糖3-溴苯硫 98%(-)-表沒食子兒茶 ≥98% (HPLC)

雞5核(5-NT)檢測(cè)試劑盒 N-乙酰-D-氨葡萄糖2-溴噻吩 98%(-)-表沒食子兒茶 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

雞5核(5-NT)檢測(cè)試劑盒 D-纖維二糖5-溴噻吩-2-磺酰  97%大黃 ≥90% (HPLC)

雞層連蛋白/板層(LN)檢測(cè)試劑盒 D-纖維二糖2-溴苯 99%表兒茶 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

雞層連蛋白/板層(LN)檢測(cè)試劑盒 D-纖維二糖3-溴苯 98%秦皮 99%

雞17-類固(17-KS)檢測(cè)試劑盒D-纖維二糖鄰溴苯 98%，含穩(wěn)定劑銅屑(-)-表沒食子兒茶沒食子酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%

雞17-類固(17-KS)檢測(cè)試劑盒D-拉伯糖4-二苯 99% 99%

雞N-乙酰-β-D-氨葡萄糖(NAG)檢測(cè)試劑盒D-拉伯糖2--3-噻吩 97%表告依春  98%

雞N-乙酰-β-D-氨葡萄糖(NAG)檢測(cè)試劑盒D-拉伯糖3-噻吩 98%魏 99%

雞神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)檢測(cè)試劑盒D-拉伯糖2--3-溴噻吩 97%漆黃 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%
ET-1 檢測(cè)試劑盒3,5-二甲酰氯(>99.0%(T))氧化固結(jié)合蛋白8抗體5-鳥一磷二鈉鹽

2,4-二肼鹽鹽(>98.0%(HPLC)(T))泛素特異性蛋白OTB1抗體5-鳥一磷二鈉鹽

O-4-硝基芐基羥鹽鹽(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)視神經(jīng)相關(guān)蛋白1抗體5-鳥二磷二鈉鹽

O-4-硝基芐基羥鹽鹽(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)鳥氨脫羧抗1抗體5-鳥二磷二鈉鹽

氮苯磺酰肼(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)嗅覺受體家族5亞基1抗體5-鳥二磷二鈉鹽

操作流程：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。