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線粒體膜電位探針使用指南

時間:2015-3-16閱讀:898
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ELISA在評估線粒體功能時,常常要用到監(jiān)控線粒體膜電位的探針,就是大家常常提到的JC-1、Rhodamine 123等。然而,在使用過程中,還需要仔細考慮多個控制,以及非質(zhì)子電荷對染料行為的影響,才能正確地闡釋結(jié)果。為此,美國羅徹斯特大學醫(yī)學及牙醫(yī)學院的研究人員撰寫了一篇使用指南,討論了實驗過程中一些重要的技術(shù)考慮、控制以及平行互補分析。文章發(fā)表在一期的《BioTechniques》上。

近年來,測量線粒體膜電位的熒光染料已成為常用的工具,來監(jiān)測重要的線粒體參數(shù)的改變。線粒體膜電位本身是細胞健康或受損的重要指示劑。而這些染料一般是親脂性陽離子化合物,它們在線粒體膜基質(zhì)空間中積累,呈反比。

測量線粒體膜電位的染料有很多種,包括TMRM、TMRE、Rhodamine 123、DiOC6(3)、JC-1等,每一種都有其優(yōu)勢和劣勢。ELISA作者在文章中就介紹了常用染料的優(yōu)勢以及潛在的困難,并強調(diào)了在生命科學研究中突出其有效應用的*方法。

對于如何計劃實驗,作者也給出了具體的建議。通常有兩種類型的實驗:*種,在細胞或組織的慢性處理之后,ELISA研究人員希望確定如何改變;第二種,研究人員希望監(jiān)測急性處理相對應的Δψm變化。盡管乍一看,第二種方法似乎更為困難,但實際上每個樣品/條件都能充當急性處理前的基線或內(nèi)對照,因此通常能提供更容易闡釋的結(jié)果。作者還詳細討論了兩種方法的考慮因素。

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