一.生物學(xué)檢測(cè)法 

生物學(xué)檢測(cè)又稱生物活性檢測(cè)，是根據(jù)細(xì)胞因子特定的生物活性而設(shè)計(jì)的檢測(cè)法。生物活性檢測(cè)法又可分為以下幾類： 

1．細(xì)胞增殖法 

許多細(xì)胞因子具有細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性，特別是白細(xì)胞介素，如IL-2刺激t細(xì)胞生激肥大細(xì)胞生激漿細(xì)胞生長(zhǎng)等。利用這一特性，現(xiàn)已篩選出一些對(duì)特定細(xì)胞因子起反應(yīng)的細(xì)胞，并建立了只依賴于某種因子的細(xì)胞系，即依賴細(xì)胞株（簡(jiǎn)稱依賴株）。這些依賴株在通常情況下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡，而加入IL-2后則可右體外長(zhǎng)期培養(yǎng)。在一定濃度范圍內(nèi)，細(xì)胞增殖與IL-2量呈正比，因此通過測(cè)定細(xì)胞增殖情況（如使用3h-tdr摻入法、MTT法等）鑒定IL-2的含量。除依賴株外，還有一些短期培養(yǎng)的細(xì)胞，如胸腺細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、促有絲分裂原刺激后的淋巴母細(xì)胞等，均可作為靶細(xì)胞來測(cè)定某種細(xì)胞因子活性。 

2．靶細(xì)胞殺傷法 

是根據(jù)某些細(xì)胞因子（如TNF）能在體外殺傷靶細(xì)胞而設(shè)計(jì)的檢測(cè)方法。通常靶細(xì)胞多選擇體外長(zhǎng)期傳代的腫瘤細(xì)胞株，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細(xì)胞的殺傷率。 

3．細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法 

某些細(xì)胞因子可刺激特定細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，如IL-2、IL-3誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞合成胺、IL-6誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測(cè)定所誘生的相應(yīng)產(chǎn)物，可反映細(xì)胞因子的活性。 

4．細(xì)胞病變抑制法 

病毒可造成靶細(xì)胞的損傷，干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變，因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)這類因子。 

二、免疫學(xué)檢測(cè)法

    細(xì)胞因子均為蛋白或多肽，具有較強(qiáng)的抗原性。隨著重組細(xì)胞因子的出現(xiàn)，可較方便地獲得細(xì)胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體，因此可利用抗原抗體特異性反應(yīng)的特性，用免疫學(xué)技術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞因子。盡管細(xì)胞因子種類繁多，只要獲得了針對(duì)某一因子的特異性抗體（包括多克隆抗體或單克隆抗體）均可采用相似的技術(shù)開展工作。常用的方法包括ELISA、RIA及免疫印跡法。免疫學(xué)檢測(cè)法可直接測(cè)定樣品中特定細(xì)胞因子的含量（用ng/ml表示），為大規(guī)模檢測(cè)臨床病人血清中細(xì)胞因子的含量提供了方便。本法僅測(cè)定細(xì)胞因子的抗原性，與該因子活性不一定相平行，因此要了解細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)，必須結(jié)合生物學(xué)檢測(cè)法。 

三、分子生物學(xué)方法

這是一類利用細(xì)胞因子的基因探針檢測(cè)特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù)。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測(cè)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的方法多種多樣，常使用斑點(diǎn)雜交、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR，細(xì)胞或組織原位雜交等。實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測(cè)物（提取的mRNA樣品或細(xì)胞/組織標(biāo)本）。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物（如生物素、地等）標(biāo)記并與目的基因互補(bǔ)的DNA段或單鏈DNA、RNA。根據(jù)其來源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點(diǎn)雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質(zhì)粒DNA的提??；②靶DNA段的分離；③靶DNA段標(biāo)記；④待測(cè)樣品mrna的提??；⑤標(biāo)記cDNA探針對(duì)待檢樣品的雜交；⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現(xiàn)的RT-PCR檢測(cè)特異性mRNA的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)，甚至從1～10個(gè)細(xì)胞中就可檢出其中的特異mRNA。