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黃曲霉毒素B單克隆抗體的制備及應用

時間:2018-11-15閱讀:255
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黃曲霉毒素(AFT)隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展,人類生活水平的提高,人們在越來越多地關注食品對人的生命安全和身體健康的影響。

在食品的污染因素中,真菌毒素對食品的污染是嚴重的污染之一,而黃曲霉毒素因其對人、畜肝臟的劇烈損害而名列毒性。

黃曲霉毒素(AFT)是一組真菌的次級代謝毒性產(chǎn)物。在天然污染的食品和飼料中以黃曲霉毒素B1(AFB1)為常見,是黃曲霉菌產(chǎn)生毒素中的主要成分,其毒性和致癌性也強,不僅給社會帶來重大的經(jīng)濟損失,而且嚴重威脅消費者的健康。

世界各國均制定了嚴格的AFT*,且*日益嚴格。我國目前還沒有自主研制、適合現(xiàn)場檢測的AFT檢測試劑盒和免疫親和柱,只有少數(shù)國家質(zhì)量監(jiān)督部門等機構使用極其昂貴的國外進口產(chǎn)品進行AFT抽樣檢測,根本無法有效地對食品、飼料的各個環(huán)節(jié)進行監(jiān)控,造成AFT污染十分嚴重。

為了解決該現(xiàn)狀,迫切需要尋找一種經(jīng)濟、快捷、準確并且易于普及推廣的AFT檢測方法,進而能夠有效地對食品的、運輸、儲存和銷售進行監(jiān)控,保障廣大消費者的健康。 本研究采用雜交瘤技術,以黃曲霉毒素B1(AFB1)—牛血清白蛋白(BSA)復合物為免疫原免疫BALB/C小鼠,制備了4株穩(wěn)定產(chǎn)生抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為1D4,2A12,3B3,4A12,對其中的2A12細胞株分泌的抗體(以下簡稱2A12單抗)進行了綜合鑒定。

2A12單抗屬IgG1,腹水效價1:5×105,親和常數(shù)1.67×1010L/mol。黃曲霉毒素類似物B1,B2,G1,G2,M1與2A12單抗的相對交叉反應率分別為100%,52.5%,28.3%,20.0%,29.1%。表明該細胞株具廣譜性,這一特點有利于作AFT總量的測定。

2A12單抗應用于三種黃曲霉毒素檢測方法:1、免疫吸附法(ELISA):檢測限為0.5ug/kg,檢測范圍0.5~50ug/kg。ELISA是常規(guī)檢測方法,通量較高,但不宜野外現(xiàn)場測定。

2、免疫親和層析—熒光光度計法(IAC-SFB):檢測限低于1ug/kg,測量范圍1~300ug/kg。IAC-SFB以免疫親和柱凈化樣品,真菌毒素熒光光度計直接報告測定結(jié)果,速度快,操作簡易、安全,且可發(fā)展為野外現(xiàn)場測定技術。

3、免疫親和層析—液相色譜法(IAC-HPLC):檢測限低于1ug/kg,測量范圍1~300ug/kg。IAC-HPLC法同樣以免疫親和柱純化(凈化)樣品,液相色譜儀檢測分析。此方法既可對AFT各亞類單獨定量,亦可進行AFT總量測定,常用于確證分析。

以上三種方法的回收率均在70%以上,變異系數(shù)1.2%到9.4%之間,符合我國有關的商品檢驗行業(yè)標準,*AFT檢測的需要,可實現(xiàn)推廣應用。

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