進口ELISA試劑盒實驗的原理由固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。實驗是否成功，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷。
降低ELISA的背景
1.洗滌步驟其實很重要，因為如果未結(jié)合的材料（如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
2.封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開放位點結(jié)合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
進口ELISA試劑盒抗體濃度須優(yōu)化
非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。
CD19    CD19抗體                
phospho-CD19(Ser227)    磷酸化CD19抗體                
CCL21    淋巴細胞趨化因子CCL21抗體                
CCR-2A    細胞表面趨化因子受體2A抗體                
CCR-2B    細胞表面趨化因子受體2B抗體                
CXCR2    細胞表面趨化因子受體2抗體                
CD10    金屬肽鏈內(nèi)切酶抗體                
Caldesmon    鈣介質(zhì)素抗體                
CCR6    細胞表面趨化因子受體6抗體                
ABCD2    胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子抗體
進口ELISA試劑盒