免疫測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化-實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
免疫測(cè)定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要涉及到抗體或抗原的使用濃度、溫育溫度、溫育時(shí)間、測(cè)定模式是采用競(jìng)爭(zhēng)抑制或雙夾心直接測(cè)定，以及雙夾心測(cè)定是采用一步還是兩步法等，其對(duì)測(cè)定的影響主要是試驗(yàn)的測(cè)定下限、特異性和簡(jiǎn)便性等。一般來說，較高的抗體或抗原反應(yīng)濃度、較高的溫育溫度(如37度而非室溫下)、較長(zhǎng)的溫育時(shí)間可以改善免疫試驗(yàn)的測(cè)定下限，但這一切又只是相對(duì)的，還要從試驗(yàn)的實(shí)際應(yīng)用著想，進(jìn)行合理的優(yōu)化。雙抗夾心酶免疫試驗(yàn)由于其簡(jiǎn)單方便，又具有較好的測(cè)定下限和特異性，在大多數(shù)蛋白激素和腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定上，現(xiàn)已基本上取代了放免競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)。雙抗夾心測(cè)定模式以兩步法進(jìn)行(即臨床樣本與酶標(biāo)抗體分兩步加入)，可避免許多用一步法時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)的問，題，如與標(biāo)記抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng)但與固相捕獲抗體無交叉反應(yīng)的物質(zhì)可在*步溫育后的洗滌步驟中去除；又如一步法常出現(xiàn)的“鉤狀”效應(yīng)(即抗原濃度很高時(shí)反應(yīng)顯色反而很淺，表現(xiàn)為測(cè)定假陰性)使用兩步法就可以避免。但由于兩步法所需測(cè)定時(shí)間相對(duì)要長(zhǎng)一些，因此目前在臨床實(shí)驗(yàn)室中使用較多的是一步法。此外，當(dāng)所測(cè)物質(zhì)分子大小不一致時(shí)，大分子的反應(yīng)通常較小分子要慢，如溫育時(shí)間短，也會(huì)造成測(cè)定偏差。例如，在測(cè)定復(fù)合的前列腺特異抗原(PSA)(Mr90kD)時(shí)，如使用較短的溫育時(shí)間，與游離PSA相比，其結(jié)果將偏低。

免疫測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化-實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)