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ELISA試劑層析技術(shù)

時間:2016-6-7閱讀:407
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ELISA試劑盒層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成:一是固定相;另一是流動相。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒(流動相)通過固定相時,由于各組分的理化性質(zhì)存在差異,與兩相發(fā)生相互作用(吸附、溶解、結(jié)合等)的能力不同,在兩相中的分配(含量對比)不同,而且隨溶媒向前移動,各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組分,隨流動相移動時受到的阻滯作用小,向前移動的速度快。反之,與固定想相互作用越強(qiáng)的組分,向前移動的速度越慢。分部收集流出液,可得到樣品中所含的各單一組分,從而達(dá)到將各組分分離的目的。
層析系統(tǒng)的必要組分有:
(1)、固定相。固定相是層析的一個基質(zhì)。它可以是固體物質(zhì)(如吸附劑、凝膠,離子交換劑等),也可以是液體物質(zhì)(如固定在硅膠或纖維素上的溶液),這些基質(zhì)能與待分離的化合物進(jìn)行可逆的吸附、溶解,交換等作用。它對層析的效果起著關(guān)鍵的作用??梢允且环N固體、凝膠或固定化的液體,由某種支持基質(zhì)所支撐。
(2)、層析床。把固定相填入一個玻璃或金屬柱中,或者薄薄涂布一層于玻璃或塑料片上或者吸附在醋酸纖維紙上。
(3)、流動相。在層析過程中,推動固定相上待分離的物質(zhì)朝著一個方向移動的液體、氣體或超臨界體等,都稱為流動相。柱層析中一般稱為洗脫劑,薄層層析時稱為展層劑。它也是層析分離中的重要影響因素之一。
(4)、運(yùn)送系統(tǒng)。用來促使流動相通過層析床。
(5)、檢測系統(tǒng)。用于檢測試管中的物質(zhì)。
層析根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)可以分為多種類型:
根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類。層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形,在柱中進(jìn)行層析。紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測分析和少量分離制備,通常為一次性使用,而柱層析是常用的層析形成。適用于樣品分析、分離。生物化學(xué)中常用的凝膠層析、離子交換層析、親和層析、液相色譜等都通常采用柱層析形式。
根據(jù)流動相的形式分類。層析可以分為液相層析和氣相層析。氣相層析是指流動相為氣體的層析,而液相層析指流動相為液體的層析。氣相層析測定樣品時需要?dú)饣?,大大限制了其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用,主要用于氨基酸、核酸、糖類、脂肪酸等小分子的分析鑒定;而液相層析是生物領(lǐng)域zui常用的層析形成,適于生物樣品的分析、分離。
根據(jù)分離的原理不同分類。層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。
    吸附層析:是以吸附劑為固定相,根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。
    分配層析:是根據(jù)在一個有兩相同時存在的溶劑系統(tǒng)中,不同物質(zhì)的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。
   凝膠過濾層析:是以具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠顆粒作為固定相,根據(jù)物質(zhì)的分子大小進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。
   離子交換層析:是以離子交換劑為固定相,根據(jù)物質(zhì)的帶電性質(zhì)不同而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。
   親和層析:是根據(jù)生物大分子和配體之間的特異性親和力(如酶和仰制劑、抗體和抗原、激素和受體等),將某種配體鏈接在載體上作為固定相,而對能與配體特異性結(jié)合的生物大分子進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。親和層析是分離生物大分子zui為有效的層析技術(shù),具有很高分辨率。

ELISA試劑盒

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