ELISA試劑盒 人胰島素基因已經(jīng)整合到銀耳基因組中；RT-PCR結(jié)果顯示，在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA；Southern雜交結(jié)果表明人胰島素基因以單拷貝的形式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗通過設(shè)置農(nóng)桿菌與銀耳芽孢不同共培養(yǎng)時間、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nóng)桿菌濃度等因素對轉(zhuǎn)化效率影響，結(jié)果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL、農(nóng)桿菌OD=0.5及共培養(yǎng)時間為2d時，轉(zhuǎn)化效率zui高，為310個轉(zhuǎn)化子/108個銀耳芽孢。

    轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接5代后對潮霉素仍有抗性，說明外源基因在銀耳芽孢中能夠不亂遺傳。在實驗室已初步建立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因方法的基礎(chǔ)上，以銀菌株Tr21-01為出發(fā)菌株，通過凍融法將攜帶有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（Hph）基由于遺傳標記及人胰島動物ELISA試劑盒素基因（BAC）為目的基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并進一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。實驗結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率；GV3101轉(zhuǎn)化率較低，且假陽性較高；LBA4404無抗性菌落長出。

    此結(jié)果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢能力具有差異性，且對受體侵染具有一定的特異性。本實驗以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株，對農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進行研究?；谵r(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受諸多因素的影響，本實驗從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培養(yǎng)時間、銀耳芽孢濃度、農(nóng)桿菌濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮（AS）的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進行優(yōu)化。其轉(zhuǎn)化前提優(yōu)化結(jié)果為：AGL-1菌液OD值為0.4～0.5，AS誘導(dǎo)培養(yǎng)濃度為250μg/mL、共培養(yǎng)濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL，共培養(yǎng)72h轉(zhuǎn)化率zui高，可達500個/10~8，且陽性菌落為89%；EHA105菌液OD值為0.4～0.5。

KLLN     Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體
Lysyl tRNA synthetase    賴氨酸t(yī)RNA的連接酶抗體
Kidins220    220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體
phospho-Kidins220 (Ser918)    磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體
KRV-VP1 + KRV-VP2 (C-terminus)    基爾曼氏細小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端
KCNQ1    鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體
KMT1A    組蛋白H3 K9甲基轉(zhuǎn)移酶抗體
KAT13D    生物鐘KAT13D蛋白抗體
KLHL36    Kelch樣蛋白36抗體
KCC4    鉀氯離子轉(zhuǎn)運蛋白KCC4抗體
phospho-KCNA3(Tyr135)    磷酸化離子通道蛋白Kv1.3抗體
KCNE4    鉀離子通道蛋白家族成員4抗體
KCNF1    電壓門控性鉀通道蛋白亞基kv5.1抗體
KCNG1    電壓門控性鉀通道蛋白亞基kv6.1抗體
KCNG3    電壓門控性鉀通道蛋白亞基KV6.3抗體

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