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左右不對稱發(fā)育因子2ELISA試劑盒的制作方法和技術原理

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左右不對稱發(fā)育因子2(LEFTY2)ELISA試劑盒   技術原理: (1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。 (2).結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。 (3).酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。 (4).受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。 (5).此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。 (6).加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
 

左右不對稱發(fā)育因子2(LEFTY2)ELISA試劑盒  elisa試劑盒制作方法:
1、取經過穩(wěn)定的血液,作離心分離15~30分鐘,每分鐘轉速為2500~3000轉,從而取得固形物,去除血漿,用水使固形物沉渣溶解。
2、置血紅素于培養(yǎng)基中,為了使培養(yǎng)基酸化而使血紅素分子中的二價鐵血紅素和血球蛋白的結合體分離,預先制備好醋酸和氯化鈉的混合物并將它加熱到90~110℃。
3、混合時將固形物的溶血產物緩慢地添加到加熱的混合物中,重新把溫度逐漸地升高到沸點,煮沸5~15分鐘,以便使結合體*分離,接著將混合物逐步冷卻到室溫。
4、為了使二價鐵血紅素溶解并消除,在混合物中按溶物產物比值2∶1~5∶1添加*醚,這時提取出來的蛋白質呈白棉絮狀,將溶液過濾,再用*醚清洗。
5、100毫升血中提取的蛋白質產品相當于14.4克,應用這種方法,每100毫升的血液可提高蛋白質得率45%。
處理辦法:
A、使用吹風機,將吹風機打開,并調節(jié)到zui高溫度,對96孔板吹1-2秒就可以了。
B、采用更好材質的板、或采用專門的96孔板振蕩器。
C、可以用tip吸走,但實驗中費事、效果還不是很理想。
D、使用注射器針頭扎破。

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