細(xì)胞因子及其受體的檢測
　細(xì)胞因子在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中起著十分重要的作用。在某些疾病時，體內(nèi)細(xì)胞因子及其受體表達(dá)可發(fā)生異常，與機(jī)體免疫功能低下或發(fā)生病理損傷有關(guān)。因此，在臨床免疫學(xué)中越來越重視對細(xì)胞因子及其受體的檢測。在基礎(chǔ)免疫研究中，常需檢測不同條件培養(yǎng)液中細(xì)胞因子的活性，并探討細(xì)胞因子產(chǎn)生水平與免疫細(xì)胞表型、增殖、殺傷及其它功能的關(guān)系。此外，原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中表達(dá)的重組細(xì)胞因子或經(jīng)過不同工藝純化后的產(chǎn)品需測定其活性和含量。

　　從細(xì)胞因子及其受體檢測的水平來說，可以分為基因組DNA、mRNA和蛋白三個不同的水平，后者又包括胞漿內(nèi)、膜表面以及分泌到體液或培養(yǎng)上清等三種不同形式細(xì)胞因子。目前應(yīng)用zui多的是檢測體液或培養(yǎng)豐清中的細(xì)胞因子以及膜表面的細(xì)胞因子受體。

　　一、生物活性檢測法

　　細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測法是根據(jù)某些細(xì)胞因子特定的生物學(xué)活性，應(yīng)用相應(yīng)的指示系統(tǒng)和標(biāo)準(zhǔn)品來反映待測標(biāo)本中某種細(xì)胞因子的活性水平，一般以活性單位來表示。生物學(xué)檢測法一般敏感性較高，直接表示待測標(biāo)本中的活性水平。但實(shí)驗(yàn)周期較長，如集落形成法需10～14；易受細(xì)胞培養(yǎng)中某些因素的影響，如血清、pH、藥物；易受生物學(xué)活性相同或相近的其它細(xì)胞因子的影響，如檢測IL-2時可受IL-4的干擾，TNF-α和TNF-β（淋巴毒素）表現(xiàn)出極為相似的生物學(xué)作用；易受待栓樣品中某些細(xì)胞因子抑制物的干擾，如IL-1活性可被IL-1受體拮抗物（IL-1ra）所抑制，TNF-α可被TNF-BP所阻斷；不能區(qū)分某些細(xì)胞因子的型和亞型，如IFN-α、β和γ，以及IFN-α中不同的亞型顯示相同的生物學(xué)活性；某些指示細(xì)胞長期培養(yǎng)易發(fā)生突變；不同指示細(xì)胞對同一種細(xì)胞因子的敏感性不同，所慕名而來結(jié)果難于標(biāo)準(zhǔn)化；此外，某些人源的細(xì)胞因子如hIL-2對小鼠細(xì)胞起作用，但鼠源性的IL-2對人的細(xì)胞則無刺激作用。

　　生物學(xué)檢測的方法大致可分為增殖或增殖抑制、集落形成、直接殺傷靶細(xì)胞、保護(hù)靶細(xì)胞免受病毒攻擊、趨化作用以及抗體形成法等幾類。

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　　其基本原理是應(yīng)用某一細(xì)胞因子能特異地刺激或抑制某些指示細(xì)胞的增殖，通過3H-TbR摻入或MTT法顯色，反映待檢細(xì)胞因子的活性水平。

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　　其基本原理是應(yīng)用骨髓干細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)系統(tǒng)，根據(jù)不同造血因子能誘導(dǎo)干細(xì)胞或定向造血祖細(xì)胞形成某一種或某些種類細(xì)胞的集落，通過對形成集落形態(tài)學(xué)、酶學(xué)鑒定，計算不同種類集落形成的數(shù)量和比例，反映待測標(biāo)本中CSF的種類和活性水平。

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　　在細(xì)胞因子中TNF-α、TNF-β具有直接殺傷某些腫瘤細(xì)胞的作用，采用TNF敏感的細(xì)胞株如小鼠成纖維細(xì)胞株L929，以及WEHI164亞克隆13作為指示細(xì)胞，通過3H-TdR釋放法或染料染色等可檢測待檢樣品中TNF的活性水平。

　?。ㄋ模┍Ｗo(hù)靶細(xì)胞免受病毒的攻擊

　　細(xì)胞因子及其受體的檢測靶細(xì)胞受某些病毒感染后可發(fā)生明顯病變和死亡，干擾素可保護(hù)靶細(xì)胞免受病毒的攻擊，常用的病毒是水皰性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）,敏感的指示細(xì)胞為喉癌的上皮細(xì)胞株Hep2和羊膜的上皮細(xì)胞WISH，通過干擾素（IFN-α、IFN-β、IFN-γ）抑制病毒致病變的程度，計算出待測樣品中IFN的活性單位。

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　　IL-8對多形核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞具有趨化作用，可用小室法或軟瓊脂趨化法，PMN或淋巴細(xì)胞作為指示細(xì)胞，以細(xì)胞趨化的程度來反映樣品中IL-8活性水平。

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　　IL-6可在體外刺激某些B淋巴細(xì)胞系產(chǎn)生和分泌免疫球蛋白，常用的指示細(xì)胞有分泌IgG的ARH-77、CESS和分泌IgM的SKW6.CL-4。在一定的條件下，待檢樣品中IL-6水平與培養(yǎng)細(xì)胞上清IgG或IgM水平正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)IL-6的對照可推算出待檢樣品中IL-6的活性。

表4-22　細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測方法（舉例）

被檢細(xì)胞因子
實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 可干擾的因素 IL-1 D.10（小鼠T細(xì)胞） 增殖法（3H-TdR、MTT） 人IL-2；小鼠IL-2、IL-4、IL-7、GM-CSF、TNF等 　 小鼠胸腺細(xì)胞 增殖法 TGF-β1、β2抑制作用 　 IL-4（小鼠胸腺瘤） CTLL轉(zhuǎn)換法（增殖法） 小鼠IL-4 　 黑素瘤細(xì)胞A352 增殖抑制法 　 IL-2 CTLL（小鼠殺傷性T細(xì)胞系） 增殖法 小鼠IL-4 IL-3 KG1（髓樣白血病細(xì)胞） 增殖法 　 　 TF-1（前髓樣細(xì)胞） 增殖法 EPO、IL-5、IL-6、GM-CSF 　 小鼠造血細(xì)胞系FDCP-1 增殖法 GM-CSF 　 人巨核母細(xì)胞白血病細(xì)胞系Mo7E 增殖法 GM-CSF、IL-9 　 骨髓半固體造血祖細(xì)胞集落形成 20α類固醇脫氫酶 GM-CSF 　 　 集落種類和數(shù)量 GM-CSF、IL-1、IL-6、G-CSF、M-CSF IL-4 小鼠B細(xì)胞 誘導(dǎo)CD23、MHCⅡ類 IFN-γ有抑制作用 　 　 抗原表達(dá) 　 　 PHA刺激的小鼠T細(xì)胞 增殖法 IL-2 　 IL-4依賴細(xì)胞株 增殖法 IL-2 　 人IL-4R轉(zhuǎn)染CTLL 增殖法 IL-2

GFβ1、TGF-β2有抑制作用 IL-7 骨髓前B細(xì)胞 增殖法 　 IL-8 中性粒細(xì)胞 軟瓊脂趨化法 其它化學(xué)趨化物質(zhì) 　 　 小室趨化法 G-CSF、M-CSF IL-9 Mo7E（巨核細(xì)胞白血病系） 增殖法 IL-3、GM-CSF IL-11 7TD1（小鼠雜交瘤細(xì)胞系） 增殖法 IL-6 　 B9（小鼠雜交瘤細(xì)胞系） 增殖法 小鼠IL-4、IL-6 　 T1165 增殖法 IL-6 IL-12 PBMC IFN-γ產(chǎn)生 IFNα/β/γ 　 PHA活化T淋巴母細(xì)胞 增殖法 IL-2、IL-4 　 PBL LAK殺傷（與IL-2協(xié)同） IL-2、IL-6 　 骨髓祖細(xì)胞 GM集落形成 IL-3；TGF-β有抑制作用 　 TF-1（前髓樣細(xì)胞） 增殖法 EPO、IL-3、IL-5、IL-6 　 小鼠造血細(xì)胞FDCP-1 增殖法 IL-3 　 人巨核母細(xì)胞白血病細(xì)胞系Mo7E 增殖法 IL-3、IL-9 　 AML-193 增殖法 　 　 造血祖細(xì)胞 粒細(xì)胞集落形成 IL-3、IL-9 　 中性粒細(xì)胞 活化后超氧釋放 GM-CSF 　 WEHI164亞克隆13或L929 殺傷作用 GM-CSF、IL-6 　 　 　 TNF-α和TNF-β（LT）有相似的殺傷作用