2014ELISA試劑盒檢測標(biāo)準(zhǔn)

    如果實(shí)驗(yàn)過程中抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)，會影響到整個實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個因素?，F(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易，仍需要確認(rèn)一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試劑盒檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會大打折扣。

    通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。 如今檢測ELISA試劑盒有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA試劑盒檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合

    在一步法測定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，ELISA試劑盒此時反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。

    假使在被測分子的不同位點(diǎn)上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性，ELISA試劑盒這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問。此外ELISA試劑盒的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。