ELISA試劑盒的操作注意事項(xiàng)及局限性

操作局限性
人胎球蛋白A直接檢測(cè)的zui低濃度為5.0 ng/ml（試驗(yàn)分析靈敏度），10000倍稀釋的樣本血清回算后，原血清樣本濃度的zui低檢測(cè)限是50 ug/ml
因人胎球蛋白A檢測(cè)無金標(biāo)準(zhǔn)，所以試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)通過稀釋含蛋白基質(zhì)的高度純化重組人胎球蛋白A建立
可直接讀取的未知樣本濃度高于350 ng/ml，建議對(duì)樣本進(jìn)一步稀釋
若實(shí)驗(yàn)室酶標(biāo)儀在450nm處的OD值不能超過2.0，建議將標(biāo)準(zhǔn)品6 舍去，不做檢測(cè)
細(xì)菌或真菌污染的樣本或試劑，或試劑間的交叉污染都可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果
聚酯樹脂處理的去離子水不能激活過氧化氫酶也稱之為α-2-HS糖蛋白，是由兩個(gè)氨基末端抑制域和一個(gè)較小的羧基末端域組成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝臟合成，分泌至血流，成年哺乳動(dòng)物體內(nèi)的濃度范圍在0.5-1.0g/L；嬰兒期的血清胎球蛋白A含量高，參與蛋白酶抑制活性，與鈣代謝和骨生成調(diào)節(jié)相關(guān)；累積于骨和牙齒內(nèi)，作為生物學(xué)上非膠原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循環(huán)中主要的鈣化抑制劑；干涉鈣鹽沉淀；近期研究顯示低水平胎球蛋白A的慢性腎臟衰竭患者與心血管病的高死亡率顯著相關(guān)；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，這是獨(dú)立于胰島素抑制劑的其他標(biāo)記物；另外，高胎球蛋白A水平還可作為心血管疾病的的危險(xiǎn)標(biāo)記物。

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）

96孔配置

48孔配置

配制

96/48人份酶標(biāo)板

1塊板（96T）

半塊板（48T）

即用型

塑料膜板蓋

1塊

半塊

即用型

標(biāo)準(zhǔn)品：800pg/ml

1瓶（0.6ml）

1瓶（0.3ml）

按說明書進(jìn)行稀稀

空白對(duì)照

1瓶（1.0ml）

1瓶（0.5ml）

即用型

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液

1瓶（5ml）

1瓶（2.5ml）

即用型

生物素標(biāo)記的抗SP抗體

1瓶（6ml）

1瓶（3.0ml）

即用型

親和鏈酶素-HRP

1瓶（10ml）

1瓶（5.0ml）

即用型

洗滌緩沖液

1瓶（20ml）

1瓶（10ml）

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

1瓶（6.0ml）

1瓶（3.0ml）

即用型

底物B

1瓶（6.0ml）

1瓶（3.0ml）

即用型

終止液

1瓶（6.0ml）

1瓶（3.0ml）

即用型結(jié) 

果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的SP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的SP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測(cè)值范圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml