Real-time PCR應(yīng)用于金葡菌檢測

    實時定量PCR是近年來備受重視的PCR技術(shù)，其中熒光定量PCR(FQ-PCR)因可通過檢測熒光強(qiáng)度的即時變化而直接檢測樣品基因拷貝數(shù)，無復(fù)雜的產(chǎn)物后處理過程，、快速，因此應(yīng)用更為廣泛。其基本原理是PCR進(jìn)行一個循環(huán)，合成了多少新鏈，就水解了多少條探針，釋放了相應(yīng)數(shù)目的熒光基團(tuán)，如果測定每一次PCR循環(huán)結(jié)束時的熒光信號，與標(biāo)準(zhǔn)品曲線對比便可確定zui初模板DNA數(shù)量。

    常規(guī)PCR是通過檢測zui終擴(kuò)增結(jié)果而判斷是否有足夠量靶基因的存在，其判斷標(biāo)準(zhǔn)易受樣品處理過程、DNA提取操作、PCR反應(yīng)體系等多種因素影響；而Real-timePCR由于其操作系統(tǒng)封閉、自動化程度高，因此可以更有效地即時檢測出目標(biāo)基因拷貝數(shù)，假陽性率低，近年來發(fā)表了大量相關(guān)的研究報告，而且通常是將其與多重PCR結(jié)合在一起以求更率。

    A．M．Costa等人以meca及nuc基因為目標(biāo)基因，進(jìn)行了多重-實時PCR并與傳統(tǒng)的PCR-電泳檢測相比較，可在2h內(nèi)非常準(zhǔn)確地檢測出金葡菌及耐甲氧西林金葡菌，有很好的應(yīng)用價值；IngeborgHein等用兩種方法針對NUC基因進(jìn)行了Real-timePCR檢測，發(fā)現(xiàn)TaqMan探針[6拷貝s～L(以nuc基因計)]比SYBRGreen工探針有更高的檢測靈敏性[60拷貝～L(以nuc基因計)l并進(jìn)一步研究了干酪中污染金葡菌的檢測情況，發(fā)現(xiàn)該方法可檢測到(1.5X10²)～(6．4X10²)拷貝／2g(以nuc基因計)，且nuc基因拷貝數(shù)與S．a(chǎn)ureus菌數(shù)有很好的對應(yīng)性(0．979-0．998)，因此該RT-PCR技術(shù)可有效地檢測金葡菌。國內(nèi)目前已經(jīng)有針對金葡菌檢測的成品RT-PCR試劑盒，如繕鉦誄鋈司臣煅榧煲呔趾蛻鉦諤蜆こ逃邢薰玖涎蟹⒌摹笆吃蔥災(zāi)虜【凳庇釶CR檢測試劑”，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、使用簡便等特點，為致病菌的快速準(zhǔn)確鑒定提供了相應(yīng)的技術(shù)保障。