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常見的PCR反應(yīng)淺析

時間:2024/4/8閱讀:157
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常見的PCR反應(yīng)淺析如下:

1、常規(guī)PCR

直接PCR是指直接從樣品擴增目標DNA,無需進行核酸分離純化。

2、熱啟動PCR

熱啟動PCR常用于增強PCR擴增的特異性。該方法主要利用抗體、親合配體、適體或化學修飾物等酶修飾酶,來抑制室溫下的DNA聚合酶的活性。這種修飾使得在PCR體系配制階段引物與模板、引物與引物之前的結(jié)合能力降低,從而避免了非特異性擴增。

3、巢式PCR

巢式PCR是標準PCR的一種演變,其增強了反應(yīng)特異性和目標擴增子的產(chǎn)量。

4、快速PCR

在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。

5、高GC含量PCR

具有高GC含量(>65%)的DNA模板由于GC堿基間的強氫鍵影響,比較難以擴增。富含GC的序列同時也涉及二級結(jié)構(gòu)。因此,富含GC的序列可導(dǎo)致DNA聚合酶沿模板擴增時卡頓"并干擾DNA合成。

6、多重 PCR:

多重PCR可在同一PCR反應(yīng)管中同時擴增多個不同的片段。多種PCR不僅意味著節(jié)省時間、試劑和樣品,還能夠同時對比多個擴增子

7、長片段 PCR:

長片段PCR通常是指擴增大于5kbDNA片段。長片段PCR傳統(tǒng)上使用 Taq DNA 聚合酶(用于快速延伸)和高保真酶(用于提高準確性)的混合物。

8、定量PCR:

序列的擴增程度(得率)取決于模板起始量,PCR常用于對樣品中的DNA進行定量,其中,最常見的應(yīng)用是 基因表達定量。


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