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設(shè)計(jì)引物應(yīng)仔細(xì)考慮原則

時間:2023/10/8閱讀:162
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引物的特異性影響 PCR 成功的概率,良好的引物設(shè)計(jì)對 PCR 擴(kuò)增的成功至關(guān)重要。當(dāng)您開始設(shè)計(jì)引物時,應(yīng)仔細(xì)考慮以下幾個原則:

1、引物的長度。PCR引物一般在18-22bp左右。這對于引物特異性和在退火溫度下的結(jié)合來說是足夠長的。

2、熔化溫度(Tm)。Tm 定義為在此溫度下,DNA 雙鏈體的一半將解離成單鏈 DNA。52-58C 范圍內(nèi)的引物 Tm 是最佳的。

3、GC 含量。最佳 GC 含量應(yīng)為 40-60%。

4、許多軟件可用于引物設(shè)計(jì),例如primer5和Oligo。這些軟件推薦的引物通??梢詽M足我們的需求。


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