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探究ELISA檢測發(fā)生“花板”原因

時間:2022/10/17閱讀:216
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      所謂ELISA檢測“花板",就是空白、陰陽性對照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高。之所以空白、對照及質(zhì)控結(jié)果正常而標(biāo)本孔異常,是因為樣品本身的原因,大部分或全部標(biāo)本孔的OD值偏高,很可能是因為樣品中某些共有的物質(zhì)非特異性的吸附于固相載體,而在實驗的過程中未被除去。
  1、待測血清中混有紅細(xì)胞或纖維蛋白原 這兩種物質(zhì)易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈,實驗表明在較高的離心轉(zhuǎn)速(3000 /min)和較長的離心時間(>10 min)之下,血液標(biāo)本被充分地離心分離之后,使紅細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,可以在加樣時避免加入紅細(xì)胞和纖維蛋白,避免這兩種干擾物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響,就可避免“花板"情況。
  2、 高IgG血癥 在實際工作中,筆者發(fā)現(xiàn),檢測丙肝的實驗出現(xiàn)花板的情況較多,原因之一是因為目前國內(nèi)外的抗-HCV EIA試劑均采用間接酶聯(lián)免疫檢測原理,間接法的一個重要影響因素是血清中所含的高濃度的非特異性IgG,IgG對聚苯乙烯有較強(qiáng)的吸附力,非特異性IgG可吸附到固相載體上或包被的抗原上造成假陽性。

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