酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。ELISA實驗操作簡單，但其影響操作因素卻很多,其中一個操作因素的改變可能會影響到其它條件的改變,最終影響整個結(jié)果的準(zhǔn)確性。
ELISA試驗影響因素:
1、標(biāo)本
對于血清標(biāo)本，采集血液時需注意溶血。此外，為避免細胞裂解釋放出目標(biāo)檢測分子影響實驗，檢測物宜進行離心去除細胞成份。
2、加樣
確保將所加物加至板孔底部，避免加在孔壁上部，不可濺出或產(chǎn)生氣泡。加不同物質(zhì)時應(yīng)注意更換槍頭，避免發(fā)生交叉污染。顯色時，最好使用排槍迅速完成加液過程，以減少反應(yīng)時間不一致引起的孔間差異。
3、稀釋
在稀釋過程中,要注意使用同一微量加樣器、同一類槍頭和容器,保證所稀釋液體容量一致。
4、孵育
37℃恒溫箱孵育時，酶標(biāo)板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒應(yīng)選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕紗布,并將酶標(biāo)板放在濕紗布上，酶標(biāo)板不可疊放,以保證各板的溫度能迅速平衡。孵育時間一般為1～1.5h，不宜過長。如采用4℃孵育,則應(yīng)將酶標(biāo)板包好,以免試劑與外界反應(yīng)或蒸發(fā)。
5、 洗滌
應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,保證洗滌液注滿各孔,洗完板后最好在吸水紙(干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干,并應(yīng)嚴(yán)格遵守洗滌時間。
6、顯色
顯色液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配；加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加完顯色液后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
7、讀板
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙擦干酶標(biāo)板底附著的液體,以減少干擾。酶標(biāo)儀應(yīng)安置在避光環(huán)境下，操作室溫宜在15～30℃，在使用前應(yīng)先預(yù)熱酶標(biāo)儀15-30分鐘，使測定結(jié)果更加穩(wěn)定。