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用ELISA試劑盒做實驗雖說操作方法簡便快速,但是操作技術(shù)的影響也是檢測結(jié)果的關(guān)鍵因素之一,操作者得細心,用心。下面公司技術(shù)人員總結(jié)了幾點,想做ELISA實驗的同學(xué)快來瞧瞧吧!
一、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸,液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔,防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
二、液體全部加入酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應(yīng)。
三、盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
四、手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
五、由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
六、實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標板只要取出所需量。
七、檢測吸光度前應(yīng)將酶標儀打開,將其預(yù)熱30min以上ELISA試劑盒。
八、孵育時要使蓋板膜封好酶標板,防止水分蒸發(fā),以防曲線不成線性。
九、底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
十、要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、20L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進行確定。
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