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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>ELISA試驗(yàn)過(guò)程中各種樣本不同的處理辦法
在搜集樣本前都必須有一個(gè)完好的方案,必須清楚要檢測(cè)的成份是否滿足穩(wěn)定。對(duì)搜集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。關(guān)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,
好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)防止重復(fù)凍融。 液體類標(biāo)本: 包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培育上清等。
血清:室溫血液天然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉積,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無(wú)菌管搜集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培育上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。
5. 培育細(xì)胞:檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)重復(fù)凍融或參加安排蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞損壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
6. 安排標(biāo)本:切開標(biāo)本后,稱取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取試劑,用手藝或勻漿器 將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。分裝后一份待檢測(cè),其他冷凍備用。
7. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)防止重復(fù)凍融。
8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
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