進口TSZ ELISA試劑盒操作要點
1.仔細(xì)閱讀說明書，確定胰島素ELISA試劑盒在有效期內(nèi)。按說明書確定所有試劑齊全，以及所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。
2.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。
3.按胰島素ELISA試劑盒說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。
4.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對。若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體，從同一家公司選擇抗體。
5.一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的Elsia操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子，那么理論推測酶活性放大ELISA方法的zui低檢測限可達1.7×10-24mol/L。
雖然在實際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達不到這個水平(大于104個分子)，但表明ELISA在靈敏度方面的改進潛力是很大的。
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