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動物基因組DNA的提取原理

時間:2016/4/15閱讀:1249
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 DNA是遺傳信息的載體,是zui重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構建等實驗,獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術中zui重要、zui基本的操作之一。ELISA試劑盒
實驗原理、目的
    DNA是遺傳信息的載體,是zui重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構建等實驗,獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術中zui重要、zui基本的操作之一。 染色體存在于細胞核中,外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個細胞,然后破碎胞膜及核膜,使染色體釋放出來,同時去除與DNA結合的組蛋白及非組蛋白。 整個實驗可分為細胞裂解、DNA分離與純化和DNA的洗脫收集。
實驗步驟
 1、取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g(0.5cm3),盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中,加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊,轉入1.5ml 離心管中,加入蛋白酶K (500ug/ml)20μl,混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min,也可轉入37℃水浴12~24h,間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min,取上清液入另一離心管中。
  2、加2倍體積異丙醇,倒轉混勻后,可以看見絲狀物,用100ul 吸頭挑出,涼干,用200ul TE 重新溶解。(可進行PCR反應等,需要進一步純化的按下列步驟進行)
  3、加等量的酚::振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。
  4、取上層溶液至另一管,加入等體積的?,振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。
  5、取上層溶液至另一管,加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇,混勻后室溫沉淀2min ,離心12000 rpm ,10min。
  6、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉。
  7、用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次,離心12000 rpm , 5min。
  8、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉,室溫干燥。
  9、加200ul TE重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?br />  10、吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。
常見問題
1、盡量簡化操作步驟,縮短提取過程。
2、減少化學因素對核酸的降解。
3、減少物理因素對核酸的降解:機械剪切力和高溫。
4、防止核酸的生物降解:排除核酸酶。

ADH6    乙醇脫氫酶6抗體
AGPAT5    溶血磷脂?;D移酶5抗體
AIPL1    遺傳性失明相關蛋白AIPL1抗體
AIRE    免疫調節(jié)蛋白AIRE抗體
phospho-AKT1 (Ser473)    磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
phospho-AKT1 (Thr72)    磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
phospho-AKT1 (Tyr326)    磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
ALDH1A2    乙醛脫氫酶2型抗體
ALDH9A1    γ-氨基丁酸醛脫氫酶抗體
AGPS    衰老相關蛋白5抗體
phospho-alpha B Crystallin (Ser59)    磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈抗體
AMBN    釉基質蛋白抗體

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