小鼠ELISA試劑盒實驗中如何正確溫育
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。 
溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內ELISA商品試劑盒的反應溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時，進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1～2小時才能有較*的結合，低于1小時，可能會影響測定下限。因此，關于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點： 
ELISA試劑盒要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。一般來說，加完樣本和/或反應試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入恒溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育的時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。 

加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近反應孔產生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產試劑盒中基本上都是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒，這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。
一般來講，正確的加樣為將所加物垂直懸空加在ELISA 反應板孔的底部（不要接觸反應板底或孔內其它液體成分），避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。

Adenovirus 5 E1A    腺病毒早期E1A蛋白抗體
phospho-ATF2 (Ser44)    磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Ser94)    磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATXN1(Thr236)    磷酸化失調癥蛋白1抗體
ANKRD17    錨蛋白重復結構域蛋白17抗體
ALDH1A1    胞質乙醛脫氫酶1抗體
ARL3    ADP核糖基化樣因子ARL3抗體
15 Lipoxygenase 1    花生四烯酸15脂氧合酶1抗體
ABC2    乳腺癌增強蛋白2抗體
Alpha 1 microglobulin    α1微球蛋白抗體

ELISA試劑盒