elisa試劑盒一般培養(yǎng)——維持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài) ES細(xì)胞培養(yǎng)用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培養(yǎng)基來(lái)阻止細(xì)胞的分化。為細(xì)胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細(xì)胞的基質(zhì)。建議每2－3天從達(dá)到80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細(xì)胞一次，細(xì)胞傳代以后，在將細(xì)胞接種在0.1％明膠包被的培養(yǎng)皿之前，通過(guò)預(yù)先將細(xì)胞接種在沒(méi)有經(jīng)過(guò)包被的組織培養(yǎng)板2個(gè)小時(shí)，使分化細(xì)胞粘附，從而將分化和未分化細(xì)胞分開(kāi)。將細(xì)胞全程置于37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養(yǎng)。   培養(yǎng)基 ES: 配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（該溶液也能用于EB培養(yǎng)基--見(jiàn)下文）。分裝在50ml FALCON管中，（稀釋為2×，每管42ml），貯存在-20℃。通過(guò)將21ml該溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制備培養(yǎng)基，0.2μm濾膜過(guò)濾。貯存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。

 貯存液  DMEM（高糖）  馬血清（HS）  L-谷氨酰胺（200mM）  MEM NEAA（10mM）  HEPES（1M）  β-巰基乙醇（55Mm）  PEST  ESGRO   復(fù)蘇細(xì)胞 細(xì)胞被凍存在10％二甲基亞砜（DMSO）中防止結(jié)晶的形成，結(jié)晶的形成會(huì)損害細(xì)胞。然而，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞有毒性，快速的進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇是很重要的。

  elisa試劑盒步驟：

1．從液氮中取出一管細(xì)胞；

2．將凍存管置于37℃水浴中2分鐘（或放到管內(nèi)溶液恰好*溶解）；

3．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一15ml Falcon管中；

4．加入5ml ES培養(yǎng)基（用培養(yǎng)基沖洗凍存管）；

5．離心3分鐘；

6．棄上清，用2ml ES培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，至少吹打10次；

7．接種在明膠包被（見(jiàn)下文）的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿；

8．孵育。  凍存細(xì)胞 凍存液 90％HS和10％二甲基亞砜  

elisa試劑盒步驟：

1．1×PBS洗細(xì)胞并留少許PBS在培養(yǎng)皿內(nèi)；

2．用細(xì)胞收集細(xì)胞；

3．將細(xì)胞轉(zhuǎn)入15ml Falcon管內(nèi)并離心3分鐘；

4．棄去上清并將細(xì)胞重懸于冷的凍存液中（10cm的培養(yǎng)皿用2ml，15cm的培養(yǎng)皿用6－7ml。）

5．分裝于凍存管內(nèi)，每管1ml；

6．置－80℃過(guò)夜，第二天移入液氮。  明膠包被 準(zhǔn)備500ml 0.1％明膠溶液

1．將0.5g明膠溶解在500ml無(wú)鈣鎂的PBS中（50－65℃水浴15～30分鐘）。

2．在溶液沒(méi)有冷卻的情況下通過(guò)0.2μm濾膜過(guò)濾，貯存在4℃。 包被培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿 1．加入足量的明膠溶液覆蓋培養(yǎng)平面（15cm培養(yǎng)皿加2ml，10cm培養(yǎng)皿加0.5～1ml，溶液的量并不重要，只要能*覆蓋培養(yǎng)表面就行了。）； 2．置室溫30分鐘；

3．去除明膠溶液，將培養(yǎng)板貯存在包裝袋中室溫放置，將板子平方，以免明膠污染蓋子和流出培養(yǎng)板。

293(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
5637(人膀胱癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
293A (人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
22RV1(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
293T(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
4T1(小鼠乳腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
6T-CEM (人T細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
769-P(人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
95-D(人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A172(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A2780(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A-375(人惡性黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A-431(人表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A549(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A673(人橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
A9(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
AAV-293(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2