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一、玻璃器皿的清洗
ELISA在制備培養(yǎng)基的過(guò)程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過(guò)一定的處理,洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝,經(jīng)過(guò)滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。
1、新購(gòu)的玻璃器皿
除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時(shí),使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對(duì)容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
2、用過(guò)的玻璃器皿
凡確無(wú)病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時(shí)沖洗,吸取過(guò)化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。ELISA有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過(guò)適當(dāng)消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當(dāng)時(shí)間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機(jī)物氧化成可溶性物質(zhì),以便沖洗。洗液有很強(qiáng)的腐蝕作用,使用時(shí)應(yīng)特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。
二、培養(yǎng)基的類型
在實(shí)驗(yàn)室中配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),都叫做培養(yǎng)基(Media)。由于各類微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同,培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同,因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn),將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。
1、ELISA根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來(lái)區(qū)分,可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。
1)天然培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料,其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有:牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。用這些物質(zhì)配成的培養(yǎng)基雖然不能確切知道它的化學(xué)成分,但一般來(lái)講,營(yíng)養(yǎng)是比較豐富的,微生物生長(zhǎng)旺盛,而且來(lái)源廣泛,配制方便,所以較為常用,尤其適合于配制實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受廠或批號(hào)等因素的影響。
2)合成培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基是一類化學(xué)成分和數(shù)量*知道的培養(yǎng)基,它是用已知化學(xué)成分的化學(xué)藥品配制而成。這類培養(yǎng)基化學(xué)成分、重復(fù)性強(qiáng),但價(jià)格昂貴,而微生物又生長(zhǎng)緩慢,所以它只適用于做一些科學(xué)研究,例如營(yíng)養(yǎng)、代謝的研究。
3)半合成培養(yǎng)基 在合成培養(yǎng)基中,加入某種或幾種天然成分;或者在天然培養(yǎng)基中,加入一種或幾種已知成分的化學(xué)藥品即成半合成培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等。這種培養(yǎng)基在實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)室中使用zui多。
2、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來(lái)區(qū)分,可以分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。
1)液體培養(yǎng)基 所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,其中的成分基本上溶于水,沒(méi)有明顯的固形物,液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。
2)固體培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂zui為常用。固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分廣泛。在實(shí)驗(yàn)室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、保藏、生物測(cè)定等。
3)半固體培養(yǎng)基 如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時(shí)可用來(lái)觀察微生物的動(dòng)力,有時(shí)用來(lái)保藏菌種。
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