牛高鐵血紅蛋白（MHB）elisa試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中高鐵血紅蛋白（MHB）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛高鐵血紅蛋白（MHB）水平。用純化的牛高鐵血紅蛋白（MHB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高鐵血紅蛋白（MHB），再與HRP標記的高鐵血紅蛋白（MHB）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高鐵血紅蛋白（MHB）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛高鐵血紅蛋白（MHB）濃度。 
牛高鐵血紅蛋白（MHB）elisa試劑盒標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
4. 血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
6. 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
7. 培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
8. 組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
自備材料
1．  蒸餾水。
2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．  振蕩器及磁力攪拌器等
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.80pg/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
4opg/ml
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20pg/ml
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10pg/ml
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5pg/ml
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
3. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
5. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
8. 溫育：操作同3。
9. 洗滌：操作同5。
10. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
11. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
12. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行牛高鐵血紅蛋白（MHB）elisa試劑盒。