人血管生長素（Ang）ELISA檢測試劑盒注意事項(xiàng)

1.從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3.為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
4.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5.底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

8.每次試驗(yàn)測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9.配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

10.實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預(yù)熱。

11.手工洗板應(yīng)注意：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

人血管生長素（Ang）ELISA檢測試劑盒樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細(xì)介紹）。

根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

加樣：1）空白孔：（空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗血管生長素（Ang）抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素標(biāo)記抗體，故在操作時不加，只加鏈霉素-HRP）；3）樣本反應(yīng)孔：加入樣本40μl，然后各加入抗血管生長素（Ang）抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

人血管生長素（Ang）ELISA檢測試劑盒結(jié)果判斷

1.每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸）

2.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計(jì)算。

3.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析計(jì)算結(jié)果。

4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計(jì)算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

試劑盒性能

準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9200。
靈敏度：zui小可檢測濃度達(dá)，0.078ng/ml。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

8. 檢測范圍： 9.8ng/ml -0.156ng/ml