免疫組化染色步驟
1. 石蠟切片脫蠟和水化后,用PBS(pH7.4)沖洗三次,每次3分鐘(3x3`)。
2. 根據(jù)每一種抗體的要求,對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。
3. 如果有必要,每張切片加1滴(試劑A)室溫下孵育10分鐘,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
PBS沖洗3x3`。
4. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl的*抗體(用戶自選),室溫下孵育60分鐘或4℃
過夜,建議參見每種抗體的說明書。
5. PBS沖洗3x5`。除去PBS液,每張切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(試劑B),室溫下孵
育40分鐘或37度孵育30分鐘或4度過夜。PBS沖洗3x3`。
6. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl新鮮配制的DAB或AEC溶液(詳見DAB或AEC使用
說明書),顯微鏡下觀察3-5分鐘(DAB)或10分鐘(AEC)。
7. 自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,若有必要,可用0.1%HCl分化,自來水沖洗,PBS返藍(lán)。
8. 如果用DAB顯色,則切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,(二甲苯透明),中性樹膠封固;如果
用AEC顯色,則切片不能酒精脫水,而直接用水性封片劑。封片。